Микробиологическое исследование в стоматологии. Микроскопия зубной бляшки
Только совокупность всех доступных методов лабораторной диагностики позволяет всесторонне обследовать пациента для выявления этиотропного агента, постановки правильного диагноза и, соответственно, назначения адекватного лечения.
Методы лабораторной диагностики воспалительных заболевания тканей пародонта можно систематизировать следующим образом:
• микробиологические;
• иммунологические;
• биохимические;
• цитологические.
Развитие воспалительных изменений в пародонте является следствием повреждающего влияния зубного налета, бактериальная флора которого является первичным фактором, вызывающим поражения пародонта при гингивите и пародонтите.
Для адекватного лечения ВЗП необходимо знать механизмы формирования микробной зубной бляшки, как причинного фактора этих заболеваний.
Зубная бляшка является продуктом микробного размножения. Она состоит из микробных масс, которые прикрепляются к вторичной кутикуле (пелликуле).
Зубная бляшка — это структурированное формирование, состоящее, главным образом, из микроорганизмов, которое визуально определяется на зубах через 1 —2 дня после прекращения чистки зубов в виде белого, сероватого либо желтоватого зубного налета. Ее постоянный прогрессирующий рост сдерживается током слюны, движением губ, языка, пищевого комка, особенно на верхних 2/3 коронок зубов. Поэтому бляшка скапливается и созревает именно в придесневых областях и межзубных промежутках. В 1 мг субстрата зрелой зубной бляшки содержится до 300 млн микроорганизмов.
Наряду с плотно прикрепленной к зубу бляшкой существуют и рыхлые микробные скопления на стенках внутри ПК. В ряде случаев именно рыхло прикрепленные микроорганизмы имеют решающее значение в развитии агрессивных форм пародонтита.
В отличие от структурированной плотной тесно связанной с поверхностью зуба бляшки, мягкий зубной налет представляет собой неструктурированную аморфную практически не скрепленную с поверхностями зуба субстанцию. Эта субстанция состоит из микроорганизмов, слущившихся эпителиальных клеток, лейкоцитов и смеси слюнных белков и липидов с частицами пищи. Мягкий зубной налет легко определяется визуально без индикаторов и удаляется простой струей воды.
На основе исследования механизмов взаимодействия между различными бактериями налета и хозяином разработана классификация пародонтальных микробных комплексов. Микробные комплексы поддесневых бляшек различаются по частоте встречающихся в их составе микроорганизмов. Выделяют красный, зеленый, желтый, пурпурный, оранжевый микробные комплексы, которые также способны вызывать поражения пародонта и другие заболевания полости рта.
Данные литературы позволяют утверждать, что при поражениях пародонта как для диагностики, так и для выбора адекватного этиопатогенетического лечения необходим микробиологический анализ. Успех и неуспех лечения часто зависят от того, удается ли идентифицировать возбудителя того или иного заболевания.
В начале истории микробиологии микроорганизмы дифференцировали только с помощью красителей: например, микроорганизмы, окрашивающиеся красителем по Граму (грамположительные) и неокрашивающиеся (грамотрицательные). Разработанные более 100 лет назад техники окрашивания используются для идентификации отдельных видов микроорганизмов и сегодня.
При определении микрофлоры полости рта в настоящее время применяется целый ряд классических методов. Так, для изучения качественного состава микрофлоры идентифицируют микроколонии и/или микробные тела при микроскопии. Количественную оценку микрофлоры проводят путем посева на селективные и неселективные среды с последующим подсчетом колоний микроорганизмов. При выборе метода лечения оценивают чувствительность микрофлоры к лекарственным препаратам.
Вместе с тем за последние полтора столетия были разработаны и внедрены в лабораторную практику десятки новых методов изучения микрофлоры, такие как проточная цитометрия, серологические исследования, анализ белков, сравнение ДНК-последовательностей и др. Однако многие из этих методов требуют приготовления бактериальных культур, что радикально удлиняет время анализа (например, проточная цитометрия), к тому же после культивирования невозможно определить начальную концентрацию микроорганизма в образце, соотношение погибших и живых клеток.
Биохимические методы, основанные на определении специфических для каждого типа клеток соединений (ферментов, витаминов, кислот и пр.), также нельзя считать стопроцентно пригодными для идентификации, поскольку многие микроорганизмы имеют сходные характеристики.
Сравнительно недавно для идентификации бактерий стали использовать масс-спектроскопию. Масс-спектрометр сортирует молекулы клетки по соотношению молекулярная масса/заряд и составляет характеристические наборы значений для каждого типа клеток. Этот метод также ограниченно годен для диагностики, поскольку клетки разных видов микроорганизмов часто обладают очень сходными молекулами, а количество этих молекул может сильно варьировать на разных стадиях клеточного цикла.
Высокоспецифичными методами определения микробных антигенов являются иммуноблоттинг и полимеразная цепная реакция, но и они имеют свои недостатки.
