Гистологические срезы. Техника выполнения гистологических срезов
Если на экспертизу поступает фиксированный материал, то приготовление препарата производят так же, как для обычного гистологического исследования. Вырезанные из разных участков кусочки толщиной не более 0,5 см после соответствующей обработки заливают в парафин и на микрогоме готовят срезы толщиной 2—3 мкм. Срезы до окраски необходимо депарафинировать и обработать раствором трипсина.
Парафин удаляют, помещая предметные стекла с наклеенными на них срезами в ксилол. Затем проводят препараты через батарею спиртов понижающейся концентрации (96%, 70%, 50%) п дистиллированную воду.
Раствор трипсина удаляет некоторое количество белков и уменьшает окрашивание межклеточного вещества и цитоплазмы клеток флюорохромом. Используют 0,25% раствор трипсина, препараты выдерживают в нем 30 мин, а затем на 2—4 с помещают в 2% раствор уксусной кислоты.
Препараты, приготовленные тем или иным способом, фиксируют метиловым спиртом (кроме гистологических срезов), окрашивают азур-эозином и флюорохромом так же, как препараты с эпителиальными клетками волос и слизистой оболочки рта.
С целью диагностики половой принадлежности тканей их исследуют сначала на Y-хроматин, окрасив флюорохромом. Что же касается частиц неизвестных тканей, то сначала необходимо решить вопрос об их органно-тканевом происхождении. Поэтому препараты окрашивают азур-эозином и после разрешения этого вопроса анализируют ядра на наличие Х-хроматина.
Целесообразно один из препаратов не окрашивать азурэозином, оставляя его для анализа на Y-хроматин. Если из частицы удалось приготовить только один препарат и он окрашен азур-эозином, то для исследования Y-хроматнна необходимо тщательно отмыть красители. Для этого препарат помещают в 10—25% раствор уксусной кислоты до удаления азура и промывают проточной водой; эозин удаляют, помещая препарат в 5— 10% раствор аммиака.
После второй промывки в проточной воде препарат можно окрасить флюорохромом.
Определение тканевой принадлежности частиц. Ориентировочное определение типа ткани возможно уже в процессе приготовления препаратов, так как под стереомикроскопом видны некоторые морфологические признаки ткани или органа. Так, твердость частицы, сохраняющаяся при помещении ее в уксусную кислоту, может свидетельствовать о том, что это кость или хрящ. Чрезвычайная мягкость частицы, которую можно измельчать сколько угодно и в любом направлении, позволяет предположить, что это мозговая ткань.
Наличие волос всегда служит признаком того, что объект является частицей кожи.
После обработки уксусной кислотой выявляют собственный цвет частиц тканей: они становятся бесцветными, матовыми, желтоватыми, буроватыми. Эти окраски являются постоянными признаками, которые можно использовать для дифференцирования типов и некоторых основных видов тканей. С этой же целью необходимо использовать и другие признаки, выявляемые при стереомикроскопии частиц во время их препаровки.
Исследование неокрашенных препаратов может дать дополнительную информацию о типе (виде) ткани исследуемой частицы и о состоянии клеток. По ним можно решить вопрос о необходимости приготовления препаратов из оставшейся части объекта.
В окрашенных препаратах анализируют морфологические признаки ткани, клеток и иеклеточных структур. Эти признаки, характерные для основных типов и некоторых видов тканей, приведены в табл. 4. В ней указаны диагностические признаки, полученные при исследовании объектов, из которых готовили давленые препараты. Как видно из этой таблицы, указанные признаки позволяют достаточно четко дифференцировать ткани, причем большинство этих признаков может сохраняться в тканях, подвергшихся аутолитическим изменениям.
