Половая принадлежность Y-хроматину. Приготовление препаратов для определения пола по Y-хроматину
Приведенная выше методика основана на выявлении Х-хроматина — цитогенетического признака женского пола и поэтому эффективна для установления половой принадлежности клеток от лиц женского пола. Заключение о происхождении клеток от лиц мужского пола делалось на основании отсутствия Х-хроматина во всех исследованных клетках. В следах крови при этом необходимо было исследовать не менее 120 нейтрофилоцитов. При ограниченном материале это снижало вероятность диагностики пола.
Поэтому не случаен был интерес, проявленный судебными медиками к открытию Y-хроматииа — цитогенетического признака мужского пола.
Исследованием экспериментальных следов крови на текстильных тканях, хранившихся от одних суток до 3 лет, и в следах на различных вещественных доказательствах давностью от 3 мес до 4 лет установлено, что в ядрах лейкоцитов, извлеченных из этих следов, Y-хроматин сохраняется, но частота его ниже, чем в мазках свежевзятой крови (Любинская С. И., Антонова С. Н., 1975).
Средняя частота Y-хроматина в лимфоцитах 52%, что на 30% ниже, чем в мазках крови; в нейтрофилоцитах 22%, т. е. ниже, чем в мазках крови, на 66%. Вместе с тем сравнительные данные о частоте Y-хроматина в лимфоцитах свежих мазков и следов крови разной давности, полученных от одних и тех же лиц, а также результаты произведенных экспертиз показали, что не имеется прямой зависимости между падением частоты Y-хроматина и давностью следа крови.
Установлено, что снижение частоты Y-хроматина связано с изменением ядер в период образования следа, которое зависит от внешних факторов, замедляющих высыхание крови на предмете-носителе.
В эпителиальных клетках в следах слюны, а также наружного корневого влагалища волос, вырванных в различное время, хорошо сохраняется Y-хроматин. Отмечено, что он обнаруживается с меньшей частотой, чем в свежих образцах (в среднем на 6— 12%), но понижение частоты происходит не в каждом случае и не зависит от давности хранения образцов.
Препараты из следов крови, слюны и корневой части волоса готовят так же, как и при исследовании Х-хроматина. Для получения более тонких препаратов необходимо содержимое, извлекаемое из следов, перенести на предметное стекло в виде небольшой капли и распределить его на площади 1—1,5 см2. Можно также сделать крупную каплю (диаметром 1,5 см); в этом случае осторожно отсасывают пипеткой часть содержимого из центра капли и переносят на другое стекло.
При подсыхании препарата из капли удаляют волокна и частицы небиологического происхождения. Высохшие препараты фиксируют от 3 до 10 мин в бюксе со спиртом (метиловым или 100° этиловым). После фиксации их можно хранить неопределенно долгое время или сразу окрасить для исследования. Перед окраской препараты смачивают дистиллированной водой (рН = 7,0), опустив в бюкс на 1—2 мин. Влажный препарат помещают в 0,5% водный раствор акрихина (атебрина и т. п.).
Время оптимальной окраски определяют с помощью контрольных препаратов — мазков мужской крови. Свежеприготовленный раствор акрихина окрашивает практически мгновенно; в повторно используемом растворе препарат держат до 15 мин. После промывания в проточной воде его помещают на 1—2 мин в дистиллированную воду и, не подсушивая, накрывают покровным стеклом. Излишек воды удаляют фильтровальной бумагой до тех пор, пока покровное стекло будет лежать неподвижно. Толстый слой жидкости между стеклами и большая толщина препарата мешают исследованию, увеличивая «вуаль» (количество рассеянного света, который снижает контрастность изображения).
Чтобы препарат не подсох за время исследования, края покровного стекла можно заплавить парафином.
