Методика исследования влияния шинного производства на зрение животных
Одной из основных задач нашего исследования являлось изучение патогенеза изменений органа зрения у работников химических производств. С этой целью проведена серия опытов на животных. Использованы кролики 6—12 мес, породы шиншилла, самцы и самки с массой тела от 1,8 до 3 кг.
Животных помещали в специальные сеточные камеры, которые устанавливали на тех участках, где отмечалось наличие токсических химических реагентов. За исключением выходных и праздничных дней, клетки с кроликами находились в цехах в течение всего рабочего дня (420 мин). Затравка продолжалась 6 мес. За кроликами вели постоянное наблюдение. В конце опыта произведены патоморфологическое и гистохимическое исследования. Всего в эксперименте находилось 34 кролика; 12 животных были контрольными.
Камеры с подопытными кроликами были установлены в подготовительном (10) и каландровом (7) цехах, а также в медико-санитарной части (4). Последняя группа животных находилась вне условий химического производства, но на территории завода. Контрольных животных содержали в виварии научно-исследовательского института офтальмологии.
Как подопытных, так и интактных животных забивали введением в мозг 20% раствора формалина. Для изучения морфологических и гистохимических изменений были использованы глаза и некоторые органы экспериментальных животных. Энуклеированные глаза и органы фиксировали в нейтральном формалине и заливали в целлоидин. Для общего окрашивания использовали гематоксилин-эозин, пикрофуксин, а для выявления аргирофильных волокон применяли метод серебрения по Футу.
Особое внимание было уделено гистохимическим исследованиям при выявлении некоторых особенностей процессов обмена веществ в тканях глаз при воздействии профессиональных вредностей. Были выбраны гистохимические методы, позволяющие выявить муконолисахариды (кислые и пейтральные), гликоген, аскорбиновую кислоту, некоторые белки, содержащие аминокислоты тирозин, триптофан и гистидин, а также нуклеиновые кислоты.
При гистохимическом изучении тканей глаза в основном пользовались фиксатором «Лизон» как наиболее приемлемым для данного объекта и отвечающим требованиям гистохимии [Кисели Д. и др.]. Кислые и нейтральные гликозамипогликаны окрашивали толуидиновым синим. Идентификацию гликозаминогликанов и гликогена проводили нутем предварительной инкубации срезов в тестикулярной гиалуронидазе и в амилазе слюны.
Выявлены вещества, дающие ШИК-положителыгую реакцию: нейтральные гликозамипогликаны, мукопротеиды, гликопротеиды и др.
При выявлении гликогена применяли фиксатор Жандра (насыщенного раствора пикриновой кислоты в 90% спирте 80 мл, формалина 15 мл, ледяной уксусной кислоты 5 мл), вызывающий торможение процессов гликогенолиза. Использовали метод, предложенный А. Л. Шабадашем. Аскорбиновую кислоту определяли по методу Жиру и Леблона.
С целью выявления аминокислотного состава белка применяли реакцию тетразониевого сочетания Даниели и Пирса, выявляющую тирозин, триптофан и гистидин [Пирс Э.].
Для гистохимического обнаружения дезоксирибонуклеиновой кислоты пользовались реакцией Фельгена, которая считается специфической для этой кислоты. Окраску по Фольгену производили исключительно на целлоидиновых срезах целых глаз, ибо опыт убедил пас в том, что целлоидиновые препараты хорошо окрашиваются. Гидролиз целлоидиновых срезов в 1% НСl проводили в течение 7 мин, затем срезы помещали в фуксинсернистую кислоту на 24 ч, 3 раза промывали сернистой водой (чтобы удалить остатки реактива Шиффа и свободного фуксина).
Затем срезы обезвоживали и помещали в бальзам. Результаты гистохимических реакций оценивали в зависимости от интенсивности окраски: +, ++, + + +, + + + +.
