Техника пункции костного мозга - получения материала для миелограммы
После клинического обследования и исследования периферической крови морфологическое изучение костного мозга составляет первостепенный тест в процессе выявления ряда гемопатий.
С исторической точки зрения исследование костного мозга прошло следующие 3 этапа:
а) гистологический — основывающийся на исследовании костного мозга в срезах костей. Исходно фрагменты костей отбирали из трупов, далее путем прижизненной трепанации;
б) цитологический — основывающийся на исследовании костномозговых клеток, отбираемых путем отсасывающей пункции грудины. После ее внедрения Аринкиным пункция грудины распространилась очень быстро, ей отдавалось предпочтение в ущерб трепанации. Эта техника привела к существенному прогрессу гематологии, поскольку предоставляла возможность описания костномозговых клеток и различных видов гемопатий. В связи с простотой и практическим характером отсасывающей пункции врачи отказались от биоптического отбора костного мозга. Вот почему долгое время гематология носила отпечаток чисто цитологического толкования костномозговых сдвигов, не учитывая изменения стромы;
в) цитогистологический — в основе которого лежит исследование костного мозга, как с цитологической точки зрения, на отпечатках или мазках размозженных комочков, так и с архитектурной точки зрения — на срезах. Срезы костного мозга получаются из фрагментов костей, отбираемых путем биоптической пунк-кии, или после гистологической обработки костномозговых комочков, отобранных при отсасывающей пункции.
Сопоставление цитологического и гистологического аспектов костного мозга необходимо для диагностики и прогноза многих гемопатий.
Показания к отсасывающей пункции костного мозга. Исследование костного мозга показано во всех случаях локализации в нем патологического процесса. Постановка диагноза возможна всегда, когда поражение костного мозга неодинаково, частично. Отсасывающая пункция преследует диагностическую цель в случае заболевания мегалобластической анемией, множественной миеломой, острой алейкемической лейкемией, панцитопенией, болезнями Гоше, Нимана-Пика, Кала-азар, генуинной тромбоцитопенической пурпурой и пр.
Существуют болезни, при которых исследование костного мозга не проводится с абсолютно диагностической целью, но представляется необходимым для уточнения причины или отдельных состояний, которые могут возникнуть во время их течения, например, железодефицитная анемия — для исследования гемосидерина, хроническая гранулоцитная лейкемия — для определения кариотипа или выявления бластического приступа, гемолитическая анемия при апластическом приступе, микроангиопатическая анемия — для выявления карциноматозного метастаза, лимфомы и пр.
Отсасывающая пункция составляет наиболее простой и быстрый метод исследования костного мозга. Эта техника основывается на тот факт, что нормальный костный мозг находится в полужидком состоянии, в связи с чем его диагностический отбор не представляет затруднений.
Для пункции используются стальные неокисляющиеся иглы различных видов, длиной от 3 до 5 см и диаметром просвета 1—2 мм. Предпочтение отдается коротким негибким иглам, без регулируемого упора с коротким срезом иглы и хорошо заостренным концом. местом отбора отсасываемой пункции у взрослого человека тело грудины, на уровне межреберных пространств II или III. В порядке частоты также могут быть использованы дужки, гребень подздошной кости, остистые отростки поясничных позвонков.
У детей пункция делается в подвздошную кость, а до двухлетнего возраста — в большеберцовое плато или пяточную кость.
Техника пункции костного мозга
После дезинфекции срединогрудиной зоны йодированным спиртом обезболивается место пункции 5—6 мл 2% ксилина. Исходно инфильтрируется кожа, затем последовательные слои до надкостницы, в которую впрыскивается большее количество обезболивающего средства Такой прием способствует определению толщины мягких слоев в виду последующей собственно пункции. До пункции не требуется назначение успокаивающих средств, даже когда речь идет о беспокойных больных Достаточна психическая подготовка, заключающаяся в уверенности больного о необходимости мероприятия и в частности об отсутствии какой-либо опасности.
Спустя несколько минут вводится игла вертикально, по срединогрудинои линии и проталкивается в кость движениями вращения или «ввертывания».
После проникновения в костномозговую полость удаляется мандрен и приспосабливается сухой, плотно прилегающий шприц на 5 или 10 мл.
Обратить внимание больного на то, что в момент отсасывания он ощутит резкую боль. Отобрать 0,5—1,5 мл костного мозга. Боль, вызываемая смещением костномозговой ткани в момент отсасывания, колеблется в зависимости от чувствительности данного больного и, в частности, от качества отсасываемого материала. Извлечение многочисленных костномозговых фрагментов вызывает острую боль, в то время как отсасывание жидкости без комков, лишено боли.
После отсасывания костного мозга снять шприц и передать помощнику. Затем вынуть иглу, наложить стерильный компресс и попросить больного придушить ладонью место пункции. Из отобранного пункцией материала часть выкладывается на предметное стекло, а другая часть вливается в маленький баллон, содержащий сухой Na2ЭДТА. В случае необходимости одновременно распределить костный мозг в специальную посуду в целях цитогенетического, ауторадиографического и/или электронномикроскопического исследования.
Обработка отобранного материала отсасывающей пункцией костного мозга. Предметное отекло, на которое нанесен костный мозг быстро наклонить, при этом стекает жидкость и можно отделить комочки. Из полученного таким образом материала делаются различные препараты. В том числе:
1. Тонкие мазки из костномозговой жидкости, растягиванием с помощью отшлифованного стекла, подобно мазкам периферической крови.
2. Мазки размозженных комочков. Углом стекла оттянуть один или несколько фрагментов, оставшихся на верхней части предметного стекла, размозжить их между двумя пластинками, расположенными перпендикулярно одна на другую, при этом прикладывается небольшое но однородное давление. Все препараты высушиваются быстро помахиванием пластинок в воздухе одним из помощников. Окраски мазков паноптиче-ская, по методу Май-Грюнвальд-Гимза, также цитохимическая для выявления гемосидерина, гликогена, пероксидаз, ЩФЛ и пр.
3. Гистологические срезы путем концентрации, закрепления и включения комочков. Крупные белесые фрагменты костномозговой ткани собрать углом или кромкой предметного стекла и оттянуть их к верхнему концу наклоненной пластинки, подождать пока костномозговая жидкость стечет полностью. После свертывания, фибрин связывает фрагменты костномозговой ткани, образуя общую массу; последнюю бережно переложить с пластинки в посуду с закрепляющей жидкостью.
После 4—24 часового закрепления включить в парафин и образовать срезы толщиной 7—10 мк. Окрасить гематоксилин-эозином, по Гимзу, Ван Гизону и аргирофильной окраской для ретикулина.
Материал, отобранный в баллон с сухим противосвертывающим веществом можно использовать для прямого подсчета: миелокариоцитов в гемоцитометре, миелокрита и приготовления мазков из костномозгового концентрата.
