Цитология: прямой цитогенетический метод выделения хромосом клеток
Прямой цитогенетический метод выделения хромосом клеток (видоизменен по Tjio и Whang):
1) В обработанную гепарином пробирку отобрать 1—2 мл костномозговой ткани посредством пункции в кость. Центрифугированием отделить плазмолейкоцитный слой (3 мин. при 800 об./мин.), набрать пастеровской пипеткой и приготовить повторную взвесь в 10 мл среды Hanks, содержащей 0,5 мл колхицина из запасного раствора 0,02 г%.
Фрагменты лимфатических узлов или селезенки, полученных биотическим способом, отбирать во флаконы с буфером солевого фосфата. После декапсуляции измельчить ножницами, промыть 2—3 раза раствором Hanks. Полученную взвесь профильтровать через стерильную марлю, отцентрифугировать (5 мин. при 800 об./мин.), осадок повторно взвесить в среде Hanks с колхицином, также как и костный мозг.
2) Инкубация при 37°С, причем срок зависит от вида болезни (1,5— 3 часа). Между различными моментами проводить центрифугирование в течение 7 мин., при 800 об./мин.
3) Гипотонический шок можно вызвать добавлением в осадок 0,50% раствора хлорида калия (0,075 М), в теплом состоянии (37°С) и оставить в комнатной температуре 10 мин. в случае костного мозга и 12—15 мин. — лимфатических узлов или селезенки.
4) Закрепление — свежеприготовленной смесью 3/1 абсолютного метанола и ледяной уксусной кислоты, при этом используемые растворы холодные. Продержать в закрепителе 45 мин. на холоде (4°С); закрепление повторить 3—4 раза. При последнем закреплении пропорция закрепляющей смеси 3/2.
5) Нанесение взвеси на влажное и холодное предметное стекло делать покапельно, а сушку — под струей теплого воздуха.
6) Окраска 5% раствором Гимза в нейтральной воде, в течение 30—60 мин. Часть препаратов бандируются спустя 6 дней.
