Показания для переливания гранулоцитов (лейкоцитов) - способы получения
Источником гранулоцитов является сосудистая кровь здоровых доноров и страдающих хронической гранулоцитной лейкемией. Поскольку гранулоциты содержат специфические антигены, обусловливающие развитие изоиммунизации необходимо проведение ряда мероприятий в связи с отбором доноров лейкоцитов. В этой связи требуется безукоризненная совместимость таких систем донора и получателя, как АВО, резус и некоторых антигенных систем, связанных с эритроцитами. Также требуется полное отсутствие гемолизинов и нерегулярных антител из зритроцитных систем.
В обязательном порядке определять гистосовместимость путем типизации по системе HL-A, проводить реакции на лимфоцитотоксичность, агглютинацию лейкоцитов, смешанную культуру лимфоцитов донора и получателя, результат которых должен быть отрицательным.
Для отделения гранулоцитов из крови донора располагаем следующими способами:
а) Приготовление лейкоцитной массы из крови, отобранной с помощью лимонной кислоты-цитрата-декстрозы, при этом масса отстаиваится самопроизвольно или посредством добавления декстрана. Сцеженная плазма содержит большое количество лейкоцитов. Метод весьма трудоемкий и неэкономичный, поскольку для-получения дозы 1 х 109 лейкоцитов/л необходима обработка 20—40 баллонов крови.
б) Лейкаферез. Отобрать 500 мл крови с помощью лимонной кислоты-цитрата-декстрозы у нормального донора или страдающего хронической гранулоцитной лейкемией; процентрифугировать препарат при скорости 1500 об./мин и сцедить плазму с лейкоцитами, при этом эритроцитную массу вновь ввести донору. В течение 4 часов можно выполнить примерно 8 подобных приемов. Этим методом можно отделить из отобранной крови около 60% лейкоцитов, его эффективность равняется 0,5 х 109 лейкоцитов в час, следовательно 2 х 109 лейкоцитов за 4 часа.
Из крови страдающих хронической гранулоцитной лейкемией можно получить большее количество лейкоцитов.
в) Фильтрация по системе непрерывного потока. Донору назначить предварительно гепарин, затем ввести канули в две вены; при этом из одной канули в другую кровь проталкивается с помощью перистальтического насоса, дебитом 30—60 мл/мин., через специальное устройство со стеклянной или найлоновой ватой. Фильтр задерживает примерно 90% гранулоцитов крови. За 2—3 часа работы можно получить 40 х 109 гранулоцитов, которые смываются с фильтра специальным раствором.
г) Центрифугирование по системе непрерывного потока. В настоящее время имеется ряд устройств для отделения крови путем центрифугирования по системе непрерывного потока. Коэффициент прохождения крови через сепаратор составляет 40 мл/мин. За 5 часов можно переработать примерно 12 л крови при эффективности метода 3,7—4,3 х 109 гранулоцитов на литр крови (всего 50 х 109 гранулоцитов за один прием).
Используя в качестве доноров больных хронической гранулоцитной лейкемией можно получить значительно большее количество гранулоцитов (около 1 х 1011), однако у таких гранулоцитов срок жизни и функциональность значительно меньше, чем у получаемых от доноров в норме.
Предложены некоторые методы обогащения крови донора гранулоцитами, которому следует ввести эндотоксины, кортизон или этиохоланолон. Более физиологическим способом считается применение гиперлейкоцитоза „Rebound", развивающегося после лейкаферезы. Плазма, получаемая повторными лейкаферезами содержит фактор высвобождения нейтрофилов ("neutrophyl releasing factor"), благодаря которому повышается лейкоцитоз.
В принципе лейкоцитная масса, получаемая одним из описанных методов, используется непосредственно, однако ее можно хранить в замороженном виде под защитой криофилактических веществ. Действие законсервированных гранулоцитов не отличается от влияния свежих лейкоцитов.
Оптимальная ежедневно применяемая доза гранулоцитов равняется примерно 0,7 х 109 клеток на кг веса тела. Взрослому человеку весом 70 кг следует назначать 50 х 109 гранулоцитов в день.
Переливание гранулоцитов показано при тяжелой лейкопении, сопровождаемой заражением крови, неподдающимся лечению обиходными способами. Подобные тяжелые лейкопении отмечаются при костномозговой аплазии после терапевтического или случайного облучения всего организма, воздействия токсических веществ (случайного или терапевтического характера), миелофтизии (раковая инвазия, медуллярный фиброз), острой лейкемии и генуинной костномозговой аплазии.
Однако переливание гранулоцитов связано с некоторым риском, в том числе, иммунизация к лейкоцитным антигенам, легочная микроэмболия, вызываемая гранулоцитными микроаггрегатами, которые могут образоваться в лейкоцитной взвеси, возникновение вторичного синдрома (отражающего реакцию трансплантата против получателя за счет имеющихся в гранулоцитном концентрате лимфоцитов). В целях устранения такого риска рекомендуется предварительное облучение гранулоцитного концентрата, уничтожающее полипотентные клетки-штамм. Переливание гранулоцитов не лишено риска передачи вирусного гепатита и прочих заразных болезней.
