Гематология
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Гематология:
Гематология
Физиология крови
Методы исследования
Анемии
Острые лейкозы
Миелодиспластические синдромы (МДС)
Хронические лейкозы
Лимфомы
Гистиоцитозы - гистиоцитоз Х
Макроглобулинемии
Коагулопатия
Патология тромбоцитов
Переливание крови
Трансплантация стволовых клеток
Книги по гематологии
Иностранные книги по гематологии
Рекомендуем:
Остальные разделы:
Абдоминальная хирургия
Анатомия человека
Акушерство
Биология
Генетика
Гепатология
Гигиена труда
Гинекология
Гистология
Дерматология
Оз и Оз
Кардиология
Лучевая медицина
Микробиология
Неврология
Неотложная хирургия
Отоларингология
Офтальмология
Профилактика заболеваний
Психология
Пульмонология
Физиология человека
Скорая помощь
Стоматология
Топографическая анатомия
Травматология
Фармакология
Необходимое:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Определение метилмалоновой кислоты в моче - методика, показатели нормы

Принцип определения метилмалоновой кислоты в моче. Метилмалоновая кислота изолируется из мочи с помощью ионообменивающей смолы Dowex 3 X 4. В контакте с двуазотистым паранитроанилином окрашивается в зеленый цвет, яркость которого измеряется спектрофотометром, при 620 ммк. а затем сопоставляется с интенсивностью эталона метилмалоновой кислоты.

Материалы для определения метилмалоновой кислоты в моче: стандартный раствор метиломалоновой кислоты 0,05 М (приготовляется из 295 мг метилмалоновой кислоты в 50 мл дистилированной воды); Dowex 3x4 (хлорноватая форма, 200—400 mesh; трижды промывается 5 объемами дистилированной воды, суспендируется в 2 объемах дистилированной воды и хранится в бутылках темного цвета при +4°С); буфер-ацетат с показателем водорода 4,3 (приготовляется из раствора 1М уксуснокислого натрия и 1М уксусной кислоты); паранитроанилин (приготовляется 0,075% раствор, растворением 375 мг реагента в 500 мл 0,2 N соляной кислоты; раствор сохраняется в бутылке темного цвета, в комнатной температуре в течение нескольких месяцев); 0,5% раствор нитрита натрия (NaNО2); раствор 2M уксуснокислого натрия; 0,1 N и 0,2 N раствора соляной кислоты; 3N раствор гидрата окиси натрия.

Реагент диазо приготовить в день испытания. Для этого, в условиях комнатной температуры, перемешать 4 мл 0,5% раствора NaNО2 и 15 мл 0,075% раствора н-нитроанилина; после охлаждения в ванне со льдом добавить 4 мл 2М раствора уксуснокислого натрия; препарат устойчив сутки при комнатной температуре.

Техника определения метилмалоновой кислоты в моче

Пробу мочи, собранную в пластмассовом флаконе, храненную в замороженном состоянии, без добавления консервирующих средств, разморозить и добавлением NaOH или НО довести до показателя водорода 6,5; возможную взвесь каких-либо материалов устранить подогревом или центрифугированием.

Для хроматографии взвесь Dowex 3x4 (хлорноватая форма) поместить в колонку 1 х 20 см, к которой приспособить резервуар на 200 мл, затем приготовить плотную колонку, величиной 3 см, для этой цели использован вакуумный насос; влить 5 мл из пробы мочи и дважды промыть смолу, для чего каждый раз использовать по 50 мл дистилированной воды, при этом соблюдать скорость стекания 5—15 мл/мин. (можно использовать вакуумный насос, обеспечивающий желаемую скорость стекания); элюировать метилмалоновую кислоту с поверхности смолы 20 мл раствора ОД N соляной кислоты, путем гравитации.

определение метилмалоновой кислоты в моче

Для цветной реакции в пробирке, величиной 2 х 15 см, замешать 2 мл элюата и 3 мл буфера-ацетат (показатель водорода 4,3), добавить 3 мл холодного реагента диазо и привести показатель водорода до 4,0; подогреть смесь в течение 3 минут в ванне с водой при температуре 94°С и добавить 2 мл 3N раствора NaOH; вынуть пробирки из воды, закрыть ватными пробками (во избежание контакта с атмосферным СО2), прогомогенизировать и оставить 10 минут для охлаждения в комнатной температуре.

Каждый набор проб сопровождается контрольной пробой реагента (содержащей 2 мл 0,1 N раствора НСl 1+3 мл реагента диазо +3 мл буфера), также стандартной пробой (дополнительно содержащей 0,02 мл 0,05 М метилмалоновой кислоты).

Колориметрия осуществляется определением оптической плотности в участке 620 нм спектрофотометра, для чего использовать баки толщиной 1 см.

Расчет результата (при описанной технике) делать по следующей формуле:
метиломалновая кислота/л. мочи = оптич. плотн. пробы (с поправокй) х 236 / оптич. плотн. стандарта (с поправкой)

(для поправки оптической плотности пробы вычесть значение оптической плотности контрольной пробы).

Толкование результатов определения метилмалоновой кислоты в моче

В зонах малых значений (соответствующих нормальным значениям — от 1 до 7 мг/сутки) коэффициент погрешности высокий (примерно ±72%); когда же речь идет о высоких значениях, этот коэффициент укладывается в пределы от 4 до 15%. Наличие иных веществ, способных реагировать в присутствии реагента диазо (кетоновые тела, мочевина и пр.) задерживаемые Dowex 3x4, не оказывает существенного влияния на результат.

При недостатке витамина В12 выделение малоновой кислоты с мочой растет от нескольких десятков мг. до более 1000 мг/сутки. В большинстве случаев эти значения быстро понижаются после лечения витамином В12.

- Читать далее "Определение фолатов крови бактериологическим методом - методика, показатели нормы"


Оглавление темы "Методы исследования в гематологии":
  1. Тест гемолиза в подкисленной сыворотке - методика, показатели нормы
  2. Антиглобулиновый тест Кумбса - методика, показатели нормы
  3. Определение витамина В12 в сыворотке бактериологическим методом с помощью Lactobacillus leishmanii - методика, показатели нормы
  4. Определение витамина В12 в сыворотке способом изотопного разбавления покрытыми частицами угля - методика, показатели нормы
  5. Определение метилмалоновой кислоты в моче - методика, показатели нормы
  6. Определение фолатов крови бактериологическим методом - методика, показатели нормы
  7. Определение выделения с мочой формиминоглютамовой кислоты (FJGlu) - методика, показатели нормы
  8. Цитология: методика получения мазка клеток в процессе митоза
  9. Цитология: блокирование митоза на метафазе и дисперсия хромосом
  10. Цитология: исследование хромосом клеток под микроскопом
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта