Оснащение лаборатории для анализа коагулограммы - гемостаза
Методы исследования гемостаза и фибринолиза весьма многочисленны. Их разновидность зависит, в первую очередь, от условий работы и лишь во вторую — от заложенного в ее основу принципа (аппаратура, реагенты).
Принципы основаны на проведение в пробирке реакций тех механизмов, которые ведут к равновесию упомянутых выше 2 явлений. Для получения правильных результатов описанные методы следует применять с соблюдением ряда правил.
Ниже приводятся: необходимое рабочее оснащение (аппаратура, инструменты, стеклянная посуда), его подготовка, способ отбора проб крови и методика работы.
Материалы для исследования гемостаза: ванна-термостат для воды 37°С:; хронометры, отсчитывающие 60 сек.; холодильник-рефрижератор (+4°С; —20°С); микроскоп; центробежка на 6000 об./мин.; тромбоэластограф (не обязательно); регулируемый подогревательный шкаф; фотометр; аналитические весы; измеритель показателя водорода; аппарат для измерения артериального давления; эксикатор; пластмассовые и стеклянные шприцы (Luer) на 5, 10, 20 мл; иглы для пункции вен № 1, 2 и 12; анатомические скрепки без зубцев и Реап; ножницы; комплет I.T.M. типа Франке, для определения времени кровотечения; различные градуированные пробирки (для отбора проб —на 10 и 20 мл; для центрифугирования проб — цилиндрические с круглым дном — стеклянные или пластмассовые; для определения гемолиза 10/100); градуированные пипетки на 1, 2, 5, 10, 25 мл; микропипетки на 0,1 и 0,2 мл; градуированные цилиндры; чашки Берзелиуса; флаконы Эрленмайера; градуированные колбы.
Приготовление оснащения для исследования гемостаза
Материал, необходимый для отбора крови и определений следует тщательно чистить, что составляет основное требование для получения по возможности точных результатов. Стеклянная посуда с царапинами или трещинами должна быть изъята из обращения.
Правильная последовательность действий в процессе чистки посуды следующая: под струей проточной воды удалить основную часть нечистот; тщательно обмыть детергентом; обильно прополоскать проточной водой для удаления детергента; погрузить в ванну с сульфохромистой смесью, ночью; тщательно прополоскать проточной водой, а затем и дистилированной водой; высушить материал в подогревательном шкафу в течение 60—90 мин., при температуре +120°С (микропипетки сушить при температуре +37°С); хранить материал в коробках, защищенных от пыли-(которая также составляет значительный фактор погрешности).
Чистка шприцев зависит от материала, используемого для их изготовления. Так, в отношение стеклянных (Luer) методика одинакова с применяемой остальному стеклянному материалу; что касается пластмассовых — не погружать в сульфохромовую ванну.
После очистки, стеклянной материал простерилизовать 30 мин. при 180°С, в то время как пластмассовый подвергнуть стерилизации путем аутоклавирования.
Иглы для пункции вен хорошо прочистить мандреном, помыть в воде с детергентом, прополоскать под струей проточной воды, затем дистилированной водой, и наконец простерилизовать в подогревательном шкафу, при температуре +180°С.
Одинаковый режим применяется взаимозаменяемым стилетам аппарата типа Франке для определения время кровотечения.
Для создания водоупорности стеклянной посуды и игл используются полимеры, производные органических соединений силикона (в отношении стеклянной посуди) и arquad (для металлов). Этим мероприятием соответствующие предметы покрываются водоупорной очень тонкой, отлично пристающей и однородной стекловидной оболочкой.
Таким образом отбор образца крови осуществляется в отличных условиях (без возможности образования сгустков на игле или в шприце), равно как и исследование тромбоцитов и отдельных плазматических факторов, на действие которых влияет контакт с не водоупорной поверхностью.
Силиконирование и десиликонирование. Стеклянные материалы, обработанные силиконом, десиликонируются следующим образом: хорошо полощаются водой, затем, на сутки, погружаютзя в раствор из 300 мл NaOH 50/100, 1 л ацетона и 1,7 л дистилированной воды.
Последующие этапы одинаковы как для десиликонированных (как отмечалось выше), так и в отношении новых материалов и состоят в следующем: отличное обмывание проточной водой и полоскание дистилированной водой; погружение, на сутки, в сульфохромистую смесь; промывание проточной водой и полоскание дистилированной водой; погружение, на 4—5 часов, в 14% раствор бикарбоната натрия; промывание проточной водой и полоскание дистилированной водой; расположение — горлышком вниз, в металлических корзинах для сушки и отекания воды (24 часа).
Далее проводится силиконирование:
— каждый стеклянный предмет наполнить раствором силикона, погрузить в него, при этом концентрация указана заводом производителей, с таким расчетом, чтобы увлажнилась вся предназначенная к силиконированию поверхность (внутренняя или наружная);
— слить силикон, перевернуть горлышком вниз и оставить сутки, чтобы вся жидкость стекла и посуда подсушилась;
— следует печение при высокой температуре (колеблющейся в зависимости от марки применяемого силикона); в подогревательном шкафу посуду разложить в таком же положении, как при отекании и сушки, тем самым обеспечивая по возможности большую однородность пленки силикона;
— просиликонированные предметы обвернуть в тонкую бумагу до использования, предохраняя их от пыли.
Просиликонированными предметами можно пользоваться полноценно не более 3 раз, после того эффект прогрессивно понижается. Для повторного использования эти предметы следует промыть под струей воды, без употребления щетки, затем высушить в комнатной температуре, в течение суток.
Аркуадизация и дезаркуадизация. Металлические части, которые должны претерпеть процесс аркуидизации подвергаются следующим приемам: мытью проточной водой и полосканию дистилированной водой (использованных игл); обезжириванию, для чего последовательно погружаются на час в спирт, эфир, ацетон (можно заменить двухчасовым погружением в трихлорэтилен или суточным погружением в технический ацетон, при этом растворитель ввести также в просвет иглы с помощью стеклянного шприца); тщательному полосканию дистилированной водой как внутри, так и снаружи; высушиванию в подогревательном шкафу (с турбиной), при температуре 120°С.
После такой обработки предметы погрузить в 2,25% раствор «аркуад 2 С» с дистилированной водой, при температуре +60°С; довести раствор до точки кипения и в таком состоянии продержать 5 мин.; затем тщательно прополоскать дистилированной водой, как внутри, так и снаружи; простерилизовать в подогревательном шкафу при температуре + 180°С и хранить в металлической коробке. Обработанными таким образом иглами можно пользоваться лишь два раза.
В целях повторной аркуадизации требуется предварительная дезаркуадизация, при этом надлежит: хорошо промыть металлические части проточной водой; погрузить в ванну с дистилированной водой и детергентом, прокипятить 15 мин. или продержать в трихлорэтилене 30 мин. при комнатной температуре; после охлаждения хорошо протереть щеткой снаружи для удаления образующихся, при кипячении, комочков аркуада; просвет хорошо прочистить мандреном; хорошо промыть под струей теплой воды и прополоскать дистилированной водой. Лишь после этого предметы можно подвергнуть повторной аркуадизации.
Парафинирование пластинок. Покрыть твердой парафиновой пленкой половину площади стекла микроскопа весьма полезно при отборе проб для счисления тромбоцитов.
Довести парафин до состояния текучести (над пламенем) затем хорошо промыть и обезжирить пластинки, и с помощью пинцета опустать каждую из них, до половины, в парафин и быстро извелчь; после затвердения парафина повторить прием. Таким образом на каждой пластинке образуется двойная пленка парафина. После обработки хранить материал в коробке, для защиты от пыли.
После отбора проба крови у больного, на покрытую парафином часть стекла нанести большую каплю крови, от которой, с помощью пипетки, отберем пробу для счисления тромбоцитов. Тем самым тромбоциты не вступают в контакт с пористостью стекла, не пристают к нему, не образуют агрегаты и результат не искажается.
P.S. В современных лабораториях пользуются одноразовыми шприцами, пробирками и их повторное применение запрещено. Тем не менее, экономические условия могут заставить вернуться к многоразовому использованию шприцов, пробирок.
