Гематология
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Гематология:
Гематология
Физиология крови
Методы исследования
Анемии
Острые лейкозы
Миелодиспластические синдромы (МДС)
Хронические лейкозы
Лимфомы
Гистиоцитозы - гистиоцитоз Х
Макроглобулинемии
Коагулопатия
Патология тромбоцитов
Переливание крови
Трансплантация стволовых клеток
Книги по гематологии
Иностранные книги по гематологии
Рекомендуем:
Остальные разделы:
Абдоминальная хирургия
Анатомия человека
Акушерство
Биология
Генетика
Гепатология
Гигиена труда
Гинекология
Гистология
Дерматология
Оз и Оз
Кардиология
Лучевая медицина
Микробиология
Неврология
Неотложная хирургия
Отоларингология
Офтальмология
Профилактика заболеваний
Психология
Пульмонология
Физиология человека
Скорая помощь
Стоматология
Топографическая анатомия
Травматология
Фармакология
Необходимое:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Цитология: косвенный цитогенетический метод выделения хромосом клеток и метод бандирования

Косвенный цитогенетический метод выделения хромосом клеток: культура и микрокультура крови (Moorhead, Arakaki) требуют, как всякая клеточная культура, условий строгой стерильности, использования адекватных материалов и культуральных сред.

Культура крови предполагает следующие этапы:
1) отбор 10—20 мл венозной крови, в зависимости от лейкоцитоза данного больного, для чего использовать обработанный гепарином шприц;
2) самопроизвольное выпадение гематий, для чего пробирку держать в вертикальном положении не более 60 мин., при температуре 4°С;

3) центрифугирование 7 мин. при 800 об./мин. отобранного пастеровской пипеткой плазмолейкоцитного слоя, затем удалить плазму. Осадок повторно взвесить в культуральной среде при клеточной концентрации 1—3 млн. клеток/мл. В основе культуральной среды находятся: Т.С. 199 Difco, показатель водорода 7—7,2, откоррегированный 5% бикарбонатом натрия, раствор стерильный; добавить 1% смесь антибиотиков (пенициллин 100 Ед и стрептомицин 100 мкг/мл) и 20% нормальной человеческой сыворотки (отобранной у не менее 7 здоровых доноров), инактивированной замораживанием.
Проводятся параллельные культуры с добавлением РНА-М (0,3 мл/10 мл клеточной взвеси) или РНА-Р (0,05 мл/10 мл клеточной взвеси) или без таковых;

4) инкубация при 37°С в течение 24 часов — культур без митогена и соответственно 72 часа культур с РНА.

микроскопия хромосом

Микрокультура крови проходит следующие этапы:
1) отбор 1 мл венозной крови с помощью обработанного гепарином шприца; из отобранного количества 10—12 капель впустить в смесь, содержащую: 4,3 мл среды Т.С. 199 Difco с показателем водорода 7—7,2 и 0,05 мл смеси антибиотиков, а также 1,5 мл человеческой сыворотки в норме.
Для лимфатического ряда добавить 0,2 мл РНА-М;

2) инкубация при 87°С в течение 24 часов — для микрокультур без митогенных веществ, и 72 часа .— для содержащих РНА.

К концу интервала развития культуры или микрокультуры добавить 0,5—1 мл 0,02% раствора колхицина на 10 мл клеточной взвеси. Инкубация проводится при 37°С в течение 1,5—3 часов.

В остальном одинаково с прямым методом, со следующими отклонениями: гипотонический шок продолжается лишь 8 минут, число закреплений больше.

Метод бандирования

Метод бандирования посредством теплового денатурирования (видоизменение по Dutrillaux-Lejeun предполагает следующие этапы:
1) среда Hanks закрепляется при показателе водорода 6,5 с помощью 5% раствора бикаргбоната натрия. Снова проверить показатель водорода после подогрева среды до 87°С и охлаждения. В случае ощелачивания сделать поправку до водородного показателя 6,5, используя однокалиевый фосфат М/15;
2) предметные стекла с нанесенными, на 6 дней раньше, хромосомами подвергнуть инкубации в описанной выше среде, на пару, при 87°С в течение 1—3 мин.;
3) резкое охлаждение в дистилированной воде;
4) окрасить в 4% растворе Гимза в фосфатном буфере, 4—5 мин. при показателе водорода 8.

- Читать далее "Характеристика хромосом при болезнях крови - кариотип в гематологии"


Оглавление темы "Лабораторная диагностика в гематологии":
  1. Цитология: прямой цитогенетический метод выделения хромосом клеток
  2. Цитология: косвенный цитогенетический метод выделения хромосом клеток и метод бандирования
  3. Характеристика хромосом при болезнях крови - кариотип в гематологии
  4. Оснащение лаборатории для анализа коагулограммы - гемостаза
  5. Реагенты для анализа коагулограммы - гемостаза
  6. Отбор проб крови для анализа коагулограммы - гемостаза
  7. Исследование капиллярной хрупкости - методика, показатели нормы
  8. Исследование адгезивности тромбоцитов - методика, показатели нормы
  9. Исследование аггрегации тромбоцитов - методика, показатели нормы
  10. Исследование факторов 3, 4 тромбоцитов - методика, показатели нормы
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта