Исследование активности факторов свертывания крови - методика, показатели нормы
Принцип исследования активности факторов свертывания крови заключается в следующем: к исследуемой плазме, оптимально разведенной буфером, добавить реагент, содержащий все факторы протромбиназообразования, за исключением подлежащего исследованию. Время, полученное в присутствии тканего тромбопластина и кальция, прямо пропорционально уровню исследуемого фактора.
Техника дифференцированной дозировки одинакова в отношении всех этих факторов (II, V, VII, X), изменяется лишь реагент, приготовление которого находится в зависимости от присущих ему свойств.
В таблице перечислены реагенты и содержащиеся в них факторы.
Активность фактора II (внутреннего фактора II). Техника. В пробирку для гемолиза влить 0,1 мл исследуемой плазмы, разведенной буфером из расчета 1/10; 0,1 мл адсорбированной на BaSО4 плазмы; 0,05 мл старой сыворотки; 0,1 мл тканевого тромбопластина; 0,1 мл 0,025 М СаС12. Привести в действие хронометр и оставить пробирку в ванне 20 сек.; затем, наклоняя пробирку, проследить образование сгустка.
Нормальные значения укладываются в пределы 25—35 сек. Активность фактора V (внутреннего фактора V). Техника. В пробирку для гемолиза влить 0,1 мл исследуемой плазмы, разведенной с физиологическим раствором или буфером Michaelis, из расчета 1/10; 0,1 мл старой плазмы от здорового человека; 0,1 мл тканевого тромбопластина; 0,1 мл 0,025 М СаС12. Привести в действие хронометр и оставить пробирку в ванне 15 сек., затем провести наблюдение за свертыванием. Нормальные значения колеблются от 20 до 30 сек.
Активность факторов VII и X. Техника. В пробирку для гемолиза влить: 0,1 мл исследуемой плазмы, разведенной с физиологическим раствором или буфером Michaelis, из расчета 1/10; 0,1 мл нормальной плазмы, пропущенной через фильтр Зейтца; 0,1 мл тканевого тромбопластина; 0,1 мл 0,025 М СаС12. Привести в действие хронометр и оставить пробирку в ванне 25 сек. затем, наклонив пробирку, проследить образование сгустка. Норма соответствует 30—40 секундам.
Активность фактора VII можно определить косвенно, следующими способами: а) дозировкой комплекса факторов VII и X; б) дозировкой фактора X, при которой, в качестве активатора, применяется не тканевой тромбопластин (ВК), а гадючий яд Русселля (Stypven). Последний коротко замыкает наличие фактора VII в процессе свертывания внешним путем. Согласованное или несогласованное толкование результатов этих двух дозировок выявляет, соответственно, нормальную или ненормальную активность фактора VII.
Активность фактора X. Техника. В пробирку для гемолиза влить: 0,1 мл исследуемой плазмы; 0,1 мл реагента Stypven-цефалин. Подвергнуть 30-секундной инкубации, добавить 0,1 мл 0,025 М СаС12. Привести в действие хронометр и оставить пробирку в ванне 10 сек., затем, наклонив пробирку, проследить свертывание.
Нормальные значения колеблятся от 14 до 16 сек. Сопоставление результата с более продолжительным временем по предыдущему методу делает возможным выявление недостатка либо фактора VII, либо фактора X.
Тромботест — метод, разработанный Owren. Его применение способствует одновременному измерению следующих 4 факторов свертывания (понижающихся в период лечения антивитамином К): II, VII, IX, X, с использованием искусственного реагента. Техника довольно чувствительная, причем применима и для капиллярной крови, что делает возможным серийное проведение большого числа проб. Результаты приводятся в процентном выражении. При значениях менее 50%, результат тромботеста считается удлиненным.
При проведении лечения антивитамином К терапевтическая зона располагается между 8—15%, в то время как опасная зона — до менее 5%.
Время факторов II + VII + X. Испытание применяется, в частности, для проверки лечения противосвертывающими веществами, типа антивитамин К, подобно тромботесту.
Техника. В пробирку для гемолиза влить: 0,1 мл исследуемой плазмы, разведенной буфером, из расчета 1/10; 0,1 мл адсорбированной плазмы человека в норме; 0,1 мл тромбопластина; 0,1 мл 0,025 М раствора СаСl2. Одновременно привести в действие хронометр и проследить свертывание .
Нормальные значения колеблятся от 25 до 40 сек. Результат можно отразить и в процентном выражении по отношению к кривой эталонирования плазмы в норме. Терапевтическая зона укладывается в пределы от 10 до 20%.
