Спектральное исследование крови для диагностики врожденной метгемоглобинемии - гемоглобина М
Необходимо для постановки диагноза врожденной метгемоглобинемии (недостаток диафоразы, наличие гемоглобина М), токсической метгемоглобинемии, сульфгемоглобинемии.
Принцип метода строится на разнице поглощения. Так, при недостатке диафоразы и токсической метгемоглобинемии максимальное поглощение метгемоглобина отмечается при длине волны 632 нм; максимальное значение метгемоглобина, происходящего от гемоглобина М наблюдается при 605, 610, 620 нм; предельное поглощение сульгемоглобина отмечается при 620 нм.
Реагенты для спектрального исследования крови при метгемоглобинемии: буфер фосфат, показатель водорода 6,7 (перемешать 10,2 мл монокалиевого фосфата М/15 и 9,8 мл двунатриевого фосфата М/15); свежая кровь, отобранная на лимоннокислом натрии.
Виды гемоглобина М при метгемоглобинемии
Метод спектрального исследования крови при врожденной метгемоглобинемии. В две пробирки налить по 5 мл буфера фосфат, с показателем водорода 6,7 и по 10 мл дистилированной воды.
В первую из них влить 5 капель крови от лица в норме, во вторую — 5 капель больного, прогомогенизировать, оставить 10 мин., затем прочитать результат на спектрофотометре по сравнению с дистилированной водой, при длине волны 600—650 нм. Прочет проводить через каждые 5 нм, а если возможно, через каждые 2 нм. Составить график каждой пробы в отдельности.
В зависимости от длины волны, при которой отмечается максимальное значение поглощения, устанавливается вид метгемоглобинемии. Разница между метгемоглобином и сульфгемоглобином определяется добавлением 1 капли 2% цианистого натрия; если речь идет о сульфгемоглобине, то максимальное значение поглощения исчезает начиная от 620 нм.
Отличить метгемоглобинемию за счет дефицита диафоразы от токсической метгемоглобинемии возможно проведением испытания лечением метиленблау.
Спустя 6—7 дней лечения в обоих случаях синюха исчезает. В случае недостатка ферментов после прекращения лечения синюха снова появляется, в то время как при токсической метгемоглобинемии она не восстанавливается.