MedUniver Кардиология
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Кардиология:
Кардиология
Основы кардиологии
Аритмии сердца
Артериальная гипертензия - гипертония
ВСД. Нейроциркуляторная дистония
Детская кардиология
Сердечная недостаточность
Инфаркт миокарда
Ишемическая болезнь сердца
Инфекционные болезни сердца
Кардиомиопатии
Болезни перикарда
Фонокардиография - ФКГ
Электрокардиография - ЭКГ
ЭхоКС - УЗИ сердца
Бесплатно книги по кардиологии
Пороки сердца:
Врожденные пороки сердца
Приобретенные пороки сердца
Кардиомиопатии
Рекомендуем:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Методы отключения гена. Условно нокаутные мыши

В качестве дополнительного к трансгенезу метода изучения роли специфических генов в развитии и физиологии мыши используют делению генов. В исследованиях по делении генов экспрессию одного или нескольких генов «отключают», или «выбивают» (нокаутируют), с целью получения мутантного животного С утратой той или иной функции.

Создание нокаутных мышей имеет следующие этапы: конструкция вектора-мишени, содержащего выбранный ген, несущий делению или нонсенс-мутацию; трансфекция плюрипотентиой эмбриональной стволовой клетки мыши в составе вектора-мишени; гомологичная рекомбинация между трансгенной конструкцией и одной копией эндогенного гена с образованием эмбриональной стволовой клетки с гомозиготной делецией выбранного для исследования гена; введение мутантной эмбриональной стволовой клетки в оплодотворенную бластоцисту мыши; имплантация зародыша в организм суррогатной матери.

В результате рождаются химерные мыши, у которых все ткани, включая гонады, частично происходят из мутантной стволовой клетки, а частично из клеток дикого типа внедренного зародыша. Эти химерные животные скрещивают с животными дикого типа. При оплодотворении яйцеклетки дикого типа мутантной спермой химерных животных получаются гетерозиготные нокаутные мыши, во всех клетках которых одна копия выбранного гена является мутантной, а другая — дикого типа.

Далее гетерозиготные животные скрещиваются друг с другом для получения нокаутных гомозигот, у которых выбранный для анализа ген отсутствует во всех клетках. Отсутствие гена у нокаутных животных реализуется в фенотип, который позволяет определить функцию гена в развитии организма, а также в нормальных физиологических условиях и при патологии. Создание нокаутных мышей технически является более сложной процедурой, чем трансгенез, на ее осуществление обычно уходит 9-12 мес.

нокаутные мыши

Условно нокаутные мыши

Инактивация жизненно важных генов обычно приводит к появлению фенотипов, характеризующихся ранней эмбриональной летальностью, которые в связи с этим трудно анализировать. Для преодоления этих затруднений были разработаны методы «отключения» гканесиецифичных генов и/или инактивации генов на разных стадиях развития.

Часто интерес представляет получение специфических мутаций генов, а не полное их элиминирование. Для создания специфических мутаций в генах дикого типа тоже применяют гомологичную рекомбинацию; разница состоит в том, что эти «включения» представляют собой трансгенную конструкцию, содержащую мутантный ген, а не делению гена. Существуют другие способы с использованием гомологичной рекомбинации, которые позволяют внедрить какой-либо другой или неродственный ген в чужой генетический локус для регуляции нового гена пол контролем промотора выбранного локуса.

Еще одним доступом к осуществлению ткансспецифичной делении генов является использование рекомбинантной системы бактериофага, называемой Cre-lox. Бактериофаг Р1 колирует фермент, называемый Сге, который катализирует рекомбинацию ДНК между двумя специфическими последовательностями (1охР-сайтами), выполняющими функцию рекомбипанионного сигнала. Эта система была адаптирована к мышам путем создания генетической конструкции, где целевой ген фланкиро ван loxP-сайтами (floxed аллель). Мышей, гомозиготных по floxed аллелю, скрещивают с трансгенными животными, экспрессирующими Cre-рекомбиназу специфичным для тканей образом (например, в клетках эндотелия, сосудистых ГМК, КМЦ).

У полученных мышей имеется деления целевого гена только в тканях, экспрессирующих Cre-рекомбиназу. Под контролем тетрациклин-зависимого промотора мышам вводят Cre-трансген, и клетки оказываются запрограммированы таким образом, что деления изучаемого гена будет иметь место только на фоне скармливания животным тетрациклина.

- Читать далее "Изучение сердца на лабораторных мышах. Перенос генов - трансфекция генов"


Оглавление темы "Генная терапия сердечно-сосудистых заболеваний":
1. Протеомика. Хроматография белков
2. Генетически модифицированные мыши в изучении сердечно-сосудистых заболеваний. Трансгенные мыши
3. Методы отключения гена. Условно нокаутные мыши
4. Изучение сердца на лабораторных мышах. Перенос генов - трансфекция генов
5. Векторы для переноса генов. Ретровирусы и аденовирусы в качестве векторов
6. Адено-ассоциированный вирус (AAV). Катионные липиды в качестве векторов
7. Изучение сердечно-сосудистых заболеваний на животных. Перенос генов в соматические клетки животных
8. Генная терапия сердечно-сосудистых заболеваний. Исследования генной терапии в кардиологии
9. Генетические факторы сердечно-сосудистых заболеваний. Наследственная предрасположенность в кардиологии
10. Аномалии хромосом человека. Анеуплоидия
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта