Оценка Т-клеток иммуннитета ребенка. Проба на функцию Т-клеток
Наиболее экономичная проба на функцию Т-клеток — кожная иммунизация антигенами Candida. Взрослым и детям старше 6 лет внутрикожно вводят 0,1 мл 1:1000 раствора активного экстракта Candida albicans. При отрицательном результате через 24, 48 и 72 ч пробу повторяют с экстрактом в разведении 1:100. Детям моложе 6 лет сразу вводят экстракт в разведении 1:100. Положительный результат пробы (местная гиперемия, уплотнение кожи более 10 мм в диаметре через 48 ч и сохранение реакции дольше 24 ч) практически исключает любые первичные дефекты Т-лимфоцитов и делает ненужными дальнейшие дорогостоящие исследования in vitro, такие как фенотипирование лимфоцитов или оценку их ответа на митогены.
Общее количество Т-клеток и их субпопуляций определяют с помощью проточной цитометрии с окрашенными моноклональными антителами к специфическим поверхностным Т-клеточным антигенам — CD2, CD3, CD4 и CD8. Такие определения особенно необходимы при лимфопении, поскольку ранняя диагностика тяжелого комбинированного иммунодефицита у детей позволяет вовремя провести трансплантацию костного мозга, которая приводит к успеху более чем в 95 % случаев.
На долю CD3 Т-клеток обычно приходится 70 % лимфоцитов периферической крови. Количество CD4 Т-клеток (хелперов) в норме примерно в 2 раза превышает число CD8 (цитотоксических) Т-клеток. Поскольку при тяжелом иммунодефиците фенотип Т-клеток может оставаться нормальным, гораздо важнее (и дешевле) исследовать их функцию. К стимуляции Т-клеток приводит взаимодействие их антигенраспознающих рецепторов (TCR) с антигеном, располагающимся в углублении молекул главного комплекса гистосовместимости (МНС).
Однако взаимодействие TCR с митогенами (фитогемагглютинином (ФГА), конкавалином А (КонА) или митогеном фитолакки (PWM)) не требует участия молекул МНС. На 3-5-е сутки инкубации с митогеном определяют пролиферацию Т-клеток по включению меченого тимидина в их ДНК. Способность Т-клеток к стимуляции можно таким же образом исследовать и в присутствии антигенов (например, Candida или столбнячного анатоксина), а также аллогенных клеток. Кроме того, можно определять цитокины, продуцируемые Т-лимфоцитами под действием митогенов.
