MedUniver Физиология человека
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Физиология человека:
Физиология
Физиология клетки
Эндокринная система
Пищеварительная система
Физиология клеток крови
Обмен веществ. Питание
Выделение.Функции почек
Репродуктивная функция
Сенсорные системы
Физиология иммунной системы
Система кровообращения
Дыхательная система
Видео по физиологии
Книги по физиологии
Рекомендуем:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Диагностика стероидных гормонов. Методы

Для точного измерения малых концентраций стероидных гормонов и их метаболитов используют иммуноанализ методом конкурентного торможения иммунопреципитации, или радиоиммуноанализ (РИА), который был впервые описан Ялоу и Берсоном в 1960 г.. Однако при дальнейшей разработке этой методики ученые столкнулись с некоторыми трудностями. Во-первых, стероиды неиммуногенны и имеют сходную структуру — циклопентан-гаптеновое ядро с небольшими вариациями, что делает затруднительным производство специфических антител.

Стероиды можно сделать иммуногенными, присоединив к ним белок-переносчик гаптен, а уровень антител можно повысить предварительной иммунизацией гаптенами. Однако участок стероида, к которому конъюгируется белок, оказывает существенное влияние на специфичность образующихся антител. Так, антитела, образующиеся при конъюгации альбумина сыворотки быка в положении 19 демонстрируют более высокую специфичность по сравнению с положениями 3 или 17. Для более точной клинической интерпретации необходимо располагать данными по перекрестной реактивности каждого антитела, выбранного для данного анализа.
Большинство фирм — производителей реагентов предоставляют данные по перекрестной реактивности своих антител, но они не всегда надежны и должны перепроверяться той лабораторией, которая будет проводить анализ.

Во-вторых, высокоаффинные связывающие белки, находящиеся в сыворотке крови, такие как ПГСГ, конкурируют с антителами и таким образом создают помехи для определения количества стероидных молекул с помощью РИА. Это приводит к трудностям для прямого измерения и требует предварительной экстракции стероида органическими растворителями, а зачастую и его хроматографической сепарации. В то же время некоторые химикаты, например 8-анилинонафталенсульфонат, способны ингибировать связывание стероида с белками, что позволяет напрямую измерить концентрацию стероида без предварительной экстракции.

диагностика стероидных гормонов

Прямой анализ занимает мало времени и может быть автоматизирован. В продаже имеются автоматизированные блоки для определения концентрации эстрадиола, прогестерона и тестостерона, которые используются во многих лабораториях. Такие анализы, однако, характеризуются слабой чувствительностью, а при определении минимальных концентраций — низкой надежностью. В связи с этим их не рекомендуется применять при определении чрезвычайно малых концентраций гормона, например эстрадиола у детей и мужчин (<100 пг/мл), тестостерона у детей и женщин (<1,5 нг/мл) [64] и прогестерона во время стимуляции яичников (<1 нг/ мл).

Проблема может быть решена с помощью экстракции сыворотки гексанэтилацетатом (в объемном соотношении 3:2) с последующим ее высушиванием и восстановлением в бесстероидной сыворотке, которая затем подвергается анализу на автоматическом блоке.

Применение газовой хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией (ГХ/МС) позволяет преодолеть многие недостатки иммуноанализа и считается более надежным и точным методом. Однако ГХ/МС проводится в несколько этапов, включая экстракцию растворителя, хроматографическое разделение и химическую интерпретацию, которые предшествуют инструментальному анализу, а чувствительность ГХ/МС часто оказывается более низкой, чем у некоторых разновидностей иммуноанализа. В последнее время эта методика вытесняется жидкостной хроматографией в сочетании с тандемной масс-спектрометрией (ЖХ/ТМС), характеризующейся более высокой чувствительностью и производительностью по сравнению с ГХ/МС.

Теперь эта новая технология считается эталонной. ЖХ/ТМС использовали для одновременного измерения уровней эстрадиола и эстрона в плазме крови человека без перекрестной реактивности. Указанные методы могут быть рекомендованы в качестве референтных и использоваться для стандартизации и одобрения иммуноаналитических исследований, которые обеспечивают необходимую для клинических нужд простоту и высокую пропускную способность.

- Читать далее "Определение уровня половых гормонов. Норма эстрогенов, прогестерона, андрогенов"


Оглавление темы "Половые гормоны":
  1. Транспорт половых гормонов. Половые гормоны связывающий глобулин (ПГСГ)
  2. Диагностика стероидных гормонов. Методы
  3. Определение уровня половых гормонов. Норма эстрогенов, прогестерона, андрогенов
  4. Пептидные гормоны яичников. Ингибины
  5. Функции активина. Влияние на синтез половых гормонов
  6. Функции фоллистатина. Влияние на синтез половых гормонов
  7. Факторы роста яичников. Инсулиноподобные и эпидермальный факторы роста
  8. Цитокины и нейропептиды влияющие на яичники. Функции
  9. Гонадотропин-рилизинг гормон (ГнРГ). Функции и синтез
  10. Функции ЛГ и ФСГ. Биохимия и синтез гонадотропных гормонов гипофиза
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта