Иммунизация от инфекции дендритными клетками. Эффективность активации врожденного иммунитета
Далее была изучена способность сингенных дендритных клеток индуцировать специфическую защиту от инфекции на модели К. pneumoniae К2. ДК получали из костного мозга мышей методом, описанным выше На 7-е сутки в культуру ДК вносили лизат К. pneumoniae K2 (50 мкл/мл) и 20 нг/мл TNF-a. На 9-е сутки ДК отмывали и ими иммунизировали мышей линии СВА.
Мышей иммунизировали в разных опытах 4-, 3- и 2-кратно с интервалом в 2 недели. В 1-м опыте ДК вводили подкожно по 2,5-3,0х106 клеток в 0,5 мл, во 2-м опыте и далее — такое же количество клеток вводили 3-кратно подкожно или внутрибрюшинно. Иммуногенную активность дендритных клеток, пульсированных лизатом К. pneumoniae К2, определяли при внутрибрюшинном заражении мышей вирулентным штаммом К. pneumoniae K2 в дозе 100 микробных клеток в объеме 0,5 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Заражали мышей через 14 суток после последней вакцинации ДК Опыт сопровождали контролем заражающей дозы на невакцинированных мышах. Наблюдение за животными проводили в течение 10 суток (гибель мышей прекращалась на 7-е сутки после заражения).
Зрелые ДК, пульсированные лизатом К.pneumoniae, при таком режиме иммунизации мышей и заражении через 14 суток предупреждали гибель от летальной дозы гомологичной инфекции в 83,3-100% случаев при 100% гибели контрольных животных, в то время как незрелые ДК при такой же постановке эксперимента не обладали протективной активностью Полученные данные свидетельствуют о возможности формирования адаптивного (специфического) иммунного ответа под влиянием ДК, обработанных гомологичным антигеном.
В следующих экспериментах по изучению специфического проти-воинфекционного эффекта дендритных клеток, созревших под влиянием различных антигенов: лизата К. pneumoniae K2 (50 мкл/мл), TNF-a (20 нг/мл) и Иммуновак-ВП-4 (25 мкг/мл) схема иммунизации ДК была сокращена до двух введений и через 14 суток заражали мышей К.pneumoniae K2 в дозе 25-50 микробных клеток.
Зрелые ДК, нагруженные лизатом К.pneumoniae К2 (с TNF-a и без TNF-a), при двукратной иммунизации обеспечивали защиту мышей в 100 % случаев, против 20 % выживших мышей в контроле. В то время как ДК, созревшие под влиянием только TNF-a, не защищали мышей от летальной дозы инфекции, а ДК, созревшие под действием Иммуновак-ВП-4, оказывали протективныи эффект в 33,3 % случаев. В этом опыте получены также данные о том, что только ДК, нагруженные гомологичным антигеном, обладали значительным протективныи эффектом, выявленным нами через 14 суток после иммунизации. Это свидетельствует о способности предъявления ДК антигенов Т-лимфоцитам, которые дифференцируются в специфические клетки-эффекторы.
Резюмируя вышеизложенное, следует отметить, что антигенпредставляющая функция ДК установлена также на модельных инфекциях мышей. Специфическая протективная активность в отношении К. pneumoniae K2, тестируемая через 14 суток после 2-4 кратного введения ДК, формируется только ДК, нагруженными гомологичным антигеном. Зрелые ДК при использовании в качестве индуктора созревания Иммуновак-ВП-4, но не нагруженные антигеном, обеспечивают в этот срок слабую защиту, что, вероятно, связано с наличием перекрестно реагирующих антигенов в составе антигенных компонентов Иммуновак ВП-4.
Активация врожденного иммунитета и возможность создания защиты от неизвестного патогена показана при одновременном введении мышам зрелых и незрелых ДК, и в качестве неизвестного патогена К. pneumoniae K2.
Получены экспериментальные факты, подтверждающие гипотезу, согласно которой активация врожденного иммунитета иммуномодуляторами бактериального происхождения, являющимися агонистами TLRs, ведет к быстрому развитию резистентности к гетерологичным патогенам. При заражении S typhimurium однократно иммунизированных Иммуновак-ВП-4 мышей выявлено значимое увеличение продолжительности жизни по сравнению с интактными животными.
Исследование цитокинового профиля у вакцинированных Иммуновак-ВП-4 мышей выявило уже через 0,5 часа после введения ВП-4 увеличение экспрессии IL-10, IL-6, через 4 часа увеличение продукции IL-12, IFN-y. При заражении таких мышей S. typhimurium отмечается полная резистентность в течение четырех суток (при гибели к этому времени 85% интактных мышей) и слабая при этом экспрессия цитокинов.
