Цитокины после стимуляции бактериальным антигеном. Защита от инфекции дендритными клетками
У иммунизированных мышей через 4 часа после заражения летальной дозой S typhimurium продукция IL-6 зависела от содержания TNF-a и CD8; IL-2 от уровня IL-4 и CD25; IL-4 от IL-2 и CD8; CD3 от IL-10 и IL-2; CD25 от IL-2; CD4 от INF-y, CD3, NK, МСН I, MCH II, CD3/NK и CD4/CD25 и т.д.
В данной группе животных продукция многих цитокинов, а также уровень экспрессии CD-маркеров взаимоопределялись, например, IL-2 и IL-4; IL-2 и CD25; IL-6 и CD8; CD8 и IL-4; IL-10 и CD3; CD4 и МНС II; CD4 и CD3/NK; CD3/NK и МНС II. В эксперименте выявлены две независимые переменные, характеризующие уровень TNF-a и NK, которые, возможно и являются факторами, способствующими инициации иммунного ответа.
В данной группе мы также обнаружили сложную сеть молекулярных взаимодействий. При этом взаимозависимыми оказались следующие параметры: IL-4 и IL-6; IL-4 и CD8; IL-6 и МНС II; IFN-y и IL-12; CD25 и МНСИ; CD25 и CD4/CD25. Независимым, как и в предыдущем эксперименте, оказался параметр, отражающий содержание NK-клеток.
Далее с помощью многомерного регрессионного анализа исследовали зависимость параметров, отражающих уровни цитокинов в сыворотках крови и экспрессии CD маркеров через 72 часа после заражения летальной дозой S typhimurium после вакцинации мышей.
На данных примерах продемонстрирована работа цитокинов по принципу сети, поскольку известно, что цитокины могут действовать согласованно (синергизм действия) или действие их может быть антагонистическим. Таким образом, было показано, что клетки-продуценты и цитокины формируют единую рецепторно-медиаторную сеть.
Защита от инфекции дендритными клетками
В наших исследованиях дендритных клеток получали из клеток костного мозга мышей линии СВА стандартным методом Для индукции созревания ДК на 7-е сутки в культуру ДК добавляли лизаты штаммов К.pneumoniae K2, К16 (50 мкл/мл), полученные из 10 микробных клеток, или ЛПС К. pneumoniae (0,125 мг/мл), или Иммуновак-ВП-4 (50 мкг/мл). На 9-е сутки культивирования ДК отмывали от среды культивирования и вводили мышам линии СВА массой 25-30 г.
Суспензию дендритных клеток (1,5-3,0 х 10) вводили внутрибрюшинно по 0,5 мл в изотоническом растворе натрия хлорида. Затем проводили заражение мышей К. pneumoniae K2 Культуру вводили в дозе 250 микробных клеток в 0,5 мл изотонического раствора натрия хлорида (100 LD50). При внутрибрюшинном введении ДК мышам независимо от характера индуктора созревания (липополисахарид, лизат К. pneumoniae или Иммуновак-ВП-4), также и не пульсированные ДК (незрелые) при одновременном введении с патогеном (К. pneumoniae) оказывали протективное действие в 83,3-100 % случаев.
Контролем служили интактные мыши, которым вводили заражающую дозу при раститровке в физиологическом растворе 250,0-25,0-2,5 микробных клеток (заражающая доза 250 микробных клеток, что составило 100LD50).
В этом опыте выявлена высокая протективная активность как стимулированных бактериальными индукторами созревания, так и незрелых ДК при их одновременном введении с высоковирулентным штаммом К. pneumoniae K2.
