Значение дендритных клеток. Представление антигенов дендритным клеткам
В последние годы в литературе появляются сообщения об использовании врожденной распознающей системы для развития новых подходов иммунотерапии. Как указывалось ранее, ДК являются ключевыми эффекторами врожденной иммунной системы и регуляции направления развития адаптивного иммунитета. Эти свойства ДК определили значительный интерес к возможности их использования в модуляции иммунного ответа при различной патологии. Однако большая часть клинических исследований сфокусирована на применении ДК при лечении опухолей. Теоретически это обосновывается тем, что соединение слабоиммуногенных опухолевых антигенов с ДК может усилить и ускорить их представление Т-лимфоцитам, а также, благодаря экспрессии регуляторных цитокинов ДК (особенно IL-12, IFN), обусловить развитие иммунного ответа по Тh1 типу.
Отработаны требования, предъявляемые к ДК, используемым для приготовления противоопухолевых и противоинфекционных вакцин. ДК должны быть зрелыми и характеризоваться фенотипом CD83, CD80, CD86, HLA-DR, CD14. Наиболее доступной и широко используемой является процедура получения ДК из CD14 моноцитов периферической крови, которую проводят в два этапа. На первой стадии моноциты дифференцируются в незрелые ДК в присутствии rGM-CSF и rlL-4 в течение 5-6 дней. На второй стадии инициируется созревание ДК под воздействием дополнительных факторов. В качестве индукторов дифференцировки ДК обычно используют среду, кондиционированную моноцитами, содержащую TNF-u, IL-1b и другие цитокины, простагландин Е2, или рекомбинантные TNF-u, IL-1b. Кроме указанных биорегуляторов, созревание ДК и индукцию секреции IL-12 могут вызвать различные ЛПС и некоторые препараты, например лейкинферон.
Для получения ДК-вакцин, ДК in vitro инкубируют с опухолевыми или бактериальными, или вирусными антигенами (пептиды, лизаты опухолевых и бактериальных клеток, кДНК, мРНК опухолевых и бактериальных антигенов, встроенных в вирусный вектор).
В настоящее время существуют три основные стратегии представления антигена ДК с целью дальнейшего клинического их использования. Антигены могут быть инкорпорированы в ДК: 1) в форме кДНК или мРНК; 2) в форме специфических антигенов (используются лизаты клеток опухоли или бактерий); 3) в форме опухолеспецифических пептидов или пептидов с неизвестной последовательностью из аутологичных опухолей, или бактериальных пептидов. Данные вакцинные конструкции могут контролировать Т-клеточный иммунитет, обеспечивая молекулярную базу для активации Th1-клеток АПК. Ограничением использования пептидов является зависимость их с HLA фенотипом пациента.
В ряде случаев клетки опухоли выделяют иммуносупрессивные факторы или факторы, препятствующие нормальному развитию АПК (IL-6, простаноиды).
Миелоидные ДК приобретают способность активировать наивные CD8' Т-клетки только после взаимодействия с Th-клетками (CD40-активация). Дифференцировка CTL у онкологических больных при ДК-вакцинации может быть индуцирована зрелыми ДК, индуцированными TNF-a + IL-1B + IL-6 + простагландин Е2. Считается, что эти ДК могут претерпевать СО40-активацию в организме больного. Зрелые ДК, представляющие анигены на молекулах МНС I класса, могут стать мишенью для CD8' CTL; данный механизм ограничивает время жизни зрелых ДК и способствует завершению Т-клеточного ответа. Плазмацитоидные ДК, возможно, не могут достичь порога активации CD8* Т-лимфоцитов. При этом даже зрелые плазмоцитоидныеДК, полученные с помощью CD40L, индуцируют дифференцировку наивных Т-клеток в регуляторные, но не в CTL.
Однако интерфероны I типа плазмацитоидных ДК способствуют созреванию миелоидных ДК, повышая их резистентность к вирусам и усиливают способность активировать CD8 Т-лимфоциты.
Растворимые белковые антигены поступают в регионарные лимфоузлы несколькими порциями. Эксперименты на мышах демонстрируют, что сразу после подкожного введения растворимого антигена значительная его часть без участия ДК поступает с током лимфы в регионарные лимфоузлы, где поглощается и представляется резидентными миелоидными ДК. Это индуцирует пролиферацию наивных Т-клеток и синтез IL-2. На этой стадии они еще остаются неполяризованными. Через сутки в регионарные лимфоузлы из места инъекции начинают мигрировать антигеннагруженные зрелые дермальные ДК. Эти ДК способствуют продукции IL-2 и IFN-y Т-клетками. Предполагается, что клетки Лангерганса начинают прибывать в регионарные лимфоузлы еще позже — на 3—4-е сутки.
Растворимые антигены, введенные в ткань мозга лабораторных животных вызывают пролиферацию Т-клеток в регионарных (глубоких шейных) лимфатических узлах. Напротив, низковирулентные вирусы, введенные в ткань мозга, вызывают Т-клеточный ответ с большим опозданием, а убитая БЦЖ вообще не распознается адаптивной иммунной системой. Таким образом, индукция ответа на корпускулярные антигены, возможно, зависит от поглощения антигена тканевыми ДК в очаге инфекции с их последующей миграцией в регионарные лимфатические узлы.
