Уровни цитокинов дендритных клеток при активации. Продукция цитокинов дендритными клетками (ДК)
Спектр и уровень цитокинов, продуцируемых ДК при активации их ИММП, главным образом экспрессия IL-12 и IFN-y, свидетельствуют о потенциале полученных ДК поляризовать иммунный ответ по первому типу — Тh1.
При сопоставлении продукции цитокинов ДК и мононуклеарными лейкоцитами (МЛ) селезенок мышей, активированных исследованными иммуномодулирующими препаратами, выявлены некоторые особенности спектра цитокинов.
Все иммуномодуляторы способствовали повышению продукции IL-1, IL-6, TNF-a, причем наибольшая активность выявлена при культивировании МЛ с ГМДП. Более активное влияние на продукцию цитокинов мононуклеарами, по сравнению с ДК, оказывал АСО. Несколько большая продукция IL-2 и IFN-y отмечена при культивировании мононуклеарных лейкоцитов с АСО.
Зрелость ДК определяется совокупностью морфологических, иммунофенотипических параметров и продукцией ими цитокинов. Полученные нами ДК из клеток костного мозга мышей, при применении в качестве индукторов созревания иммуномодуляторов микробного происхождения (Иммуновак-ВП-4, ГМДП, АСО) и TNF-a обладали типичной морфологической характеристикой зрелых клеток — имели многочисленные разветвленные отростки на поверхности, необходимые для контакта с окружающими клетками, в частности для эффективного представления антигена Т-лимфоцитам, овальную форму с эксцентрично расположенным ядром, чаще неправильной формы с хроматином. Под воздействием иммуномодуляторов микробного происхождения исчезала вуалевидная цитоплазма, снижалась фагоцитарная активность, что характерно для зрелых ДК.
Иммуномодуляторы микробного происхождения оказались активными индукторами созревания ДК у мышей. Созревшие под влиянием иммуномодуляторов, ДК характеризуются типичным иммунофенотипом: CD34, CD38, CD40, CD80, CD86, МНС I, МНС II, F4/80.
Оценка профиля и уровня цитокинов, продуцируемых дендритными клетками, также демонстрирует высокую активность зрелых ДК. Под воздействием всех исследуемых иммуномодуляторов ДК синтезировали большое количество TNF-a, IL-6, IL-12, INF-y и IL-1b. Выявленный нами спектр цитокинов позволяет сделать заключение о готовности ДК, обработанных исследованными препаратами, направлять иммунный ответ по Th1-типу.
Важнейшим показателем влияния различных препаратов на иммунную систему является пролиферативная активность лейкоцитов. Изучение влияния ИММП на пролиферативный потенциал МЛПК доноров было начато с оценки влияния поликомпонентной вакцины Иммуновак-ВП-4 на митогенез лимфоцитов в 72-часовых культурах по сравнению с Т-клеточным митогеном ФГА и коммерческими ЛПС К pneumoniae и Е. coli, входящих в состав вакцины. Все исследуемые митогены в диапазоне доз от 5,0 до 20,0 мкг/мл стимулировали пролиферативную активность МЛПК.
При этом наблюдался дозозависимый эффект — с увеличением концентраций препаратов возрастало содержание властных форм клеток в культуре, что сопровождалось повышением и индекса стимуляции. Из исследуемых бактериальных препаратов активность Иммуновак-ВП-4 была наиболее высокой. По содержанию властных форм культуры МЛПК, стимулированные Иммуновак-ВП-4 в дозе 10 мкг/мл, отличались от таковых при стимуляции ФГА и в дозах 10, 15, 20 мкг/мл были значительно выше, чем при действии бактериальных ЛПС.
МЛПК, полученные в этих условиях, представляли собой крупные лимфоидные клетки типа иммунобластов с типичной базофилией цитоплазмы и конденсацией хромосом. Иммуновак-ВП-4 и известные митогены не оказывали влияния на жизнеспособность клеток, которая оценивалась стандартным методом суправитальной окраски 0,2% раствором трипанового синего.
