Длительность генерации антителообразующей клетки. Формирование АОК
Активация В-клеток приводит к превращению предшественников АОК в антителообразующие клетки и к началу их пролиферации. Прежде всего необходимо остановиться на вопросе о продолжительности генерации АОК. Она определялась несколькими методами:
1) по доле делящихся АОК, содержащих метку через различные промежутки времени после добавления радиоактивного тимидина;
2) по зависимости между интенсивностью гибели АОК и продолжительностью действия на них ядов, влияющих на клетки лишь в определенные стадии митотического цикла (например, оксимочевины, действующей в S-фазу).
Согласно мнению большинства исследователей, время генерации АОК как у мышей, так и у кроликов колеблется от 8 до 13 час, а продолжительность S-фазы — от 5 до 8 час.
Были сделаны попытки проследить изменение интенсивности синтеза антител и иммуноглобулинов на разных стадиях клеточного цикла лимфатических клеток. По-видимому, все исследователи наблюдали уменьшение синтеза иммуноглобулинов во время митоза. Данные об изменении интенсивности синтеза на разных стадиях цикла противоречивы.
Одни исследователи наблюдали быстрое увеличение в несколько раз синтеза антител и иммуноглобулинов в течение Gj-фазы и первой половины S-фазы, затем снижение этих процессов (Takahashi е. а., 1969; Cowan, Milstein, 1972; Thomas, 1974; Thomas e. a., 1975).
Другие же исследователи указывают на относительное постоянство синтеза иммуноглобулинов в течение межмитотического периода (Liberti, Bagliony, 1973). Возможно, что противоречия связаны с тем, что синтез иммуноглобулинов, их внутриклеточное накопление и их секреция изменяются на протяжении митотического цикла несинхронно (Byers, Kjdson, 1970).
Митотический цикл В-лимфоцитов сопровождается и другими периодическими изменениями. Например, уровень цАМФ и активность аденилциклазы в G,- и 02-фазах повышается, а в М-фазе снижается (Millis е. а., 1974).
Принципиальное значение имеет вопрос о том, связаны ли с делением превращения клеток-предшественников, не образующих антитела, в клетки, их образующие, и обусловлено ли последующее нарастание числа АОК только делением клеток, уже образующих антитела. Согласно мнению большинства исследователей, оба эти процесса связаны с делением клеток. В пользу этого мнения говорят следующие факты. Если одновременно с антигеном ввести радиоактивный тимидин, то в ядрах всех образовавшихся после иммунизации АОК обнаруживается радиоактивная метка (Hunig е. а., 1974). Ингибиторы митоза тормозят индукцию и развитие антителообразования. Добавленный к культурам радиоактивный тимидин с высокой удельной активностью накапливается в ядрах пролиферирующих клеток и убивает их, при этом прекращается нарастание числа АОК.
Наряду с этим имеются и данные, убедительно указывающие на возможность (по крайней мере при некоторых условиях) превращения без деления клеток, не образующих антитела, в клетки, их образующие. Так, в некоторых случаях иммунизация вызывает столь быстрое появление АОК или увеличение их числа, что это трудно объяснить делением. При действии некоторых митогенов на суспензию клеток селезенки число АОК может за 1 час увеличиться почти в 2 раза (Rich, Pierce, 1973).
Время удвоения числа АОК в клеточных культурах иногда составляло всего лишь 3,4 часа (Fidler, 1975) или 4,0 часа (Dutton, Mishell, 1967). Между тем, как мы видели выше, продолжительность митотического цикла АОК, определенная различными методами, была не меньше 8—13 час. Культивирование перитонеальных клеток с антигеном приводило к появлению АОК даже в том случае, когда в среде присутствовали ингибиторы митоза (например, колхицин) (Bussard, 1969).
На то, что нарастание числа АОК после иммунизации не связано с размножением одного клона АОК, образовавшегося при индукции антителообразования, указывают опыты в полиакриламидных камерах. В таких камерах клетки суспензии селезенки мыши разделены на отдельные группы (фокусы). Оказалось, что суммарное увеличение числа АОК происходило не только за счет размножения АОК в фокусах, где они уже присутствуют, а также за счет появления АОК в новых фокусах, ранее их не содержавших (Marbrook, Haskill, 1974).
На основании этих и некоторых других фактов ряд исследователей склонен признать, что увеличение числа АОК (во всяком случае при некоторых условиях), может быть связано с двумя процессами: делением клеток, образующих данное антитело, и переходом к антителообразованию клеток, которые ранее антител не образовывали (процесс вовлечения в антителообразование).
