MedUniver Физиология человека
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Физиология человека:
Физиология
Физиология клетки
Эндокринная система
Пищеварительная система
Физиология клеток крови
Обмен веществ. Питание
Выделение.Функции почек
Репродуктивная функция
Сенсорные системы
Физиология иммунной системы
Система кровообращения
Дыхательная система
Видео по физиологии
Книги по физиологии
Рекомендуем:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Методы выделения полирибосом. Размеры полирибосом синтезирующие антитела

В настоящее время для выделения полирибосом из лимфоидных тканей и миеломных опухолей обычно используют гомогенизацию их в трис-буферных растворах (рН 7,0—7,6), содержащих сахарозу, КСl (или реже — NaCl), MgCl2 (или ацетат магния) и какой-нибудь из ингибиторов РНКазы (чаще — гепарин). Необходимым условием является использование реактивов, не содержащих РНКазы. Из гомогената сначала удаляют ядра и митохондрии, к постмитохондриальному супернатанту добавляют какой-либо из детергентов (дезоксихолат натрия, или тритон Х-100), растворяющий мембраны энодоплазматического ретикулума, и полиробосомы осаждают (или фракционируют) в ступенчатом (0,5—1,5 М) или линейном (обычно 15—30%-ном) градиентах сахарозы. Выход полирибосомного материала составляет при этом 30—50% от числа всех клеточных рибосом.

На степень нативности полирибосом, получаемых из разных источников, влияют концентрация сахарозы, ионная сила и рН буферного раствора, соотношение K/Mg и природа используемого детергента. Так, для получения полирибосом из селезенки предпочтительнее использовать тритон Х-100, так как в присутствии дезоксихолата натрия отмечалась их деградация. В некоторых случаях рекомендуется также добавление небольших количеств СаС12, или спермидина, повышающих стабильность клеточных ядер (Горюнова и др., 1974; Wall е. а., 1977), и 2-меркаптоэтанола (Schechter, 1973). С целью сократить время контакта полирибосом с клеточным лизатом можно также сразу наносить клетки на содержащий ингибитор детергент, наслоенный прямо на сахарозный градиент. В этом случае при центрифугировании клеткп одновременно и лизируются, и фракционируются (Davis е. а., 1969).

Необходимо отметить, что выделение нативных полирибосом из клеток нормальных лимфоидных тканей или тканей иммунизированных животных является значительно более сложной и менее разработанной процедурой, чем выделение их из плазмоцитом. Возможно, это связано с тем, что в плазмоцитомах имеется эндогенный ингибитор РНКазы, в то время как в селезенке и лимфоузлах его нет, а активность РНКазы при иммунизации даже возрастает.

выделение полирибосом

Существенную роль, по-видимому, играет и вид животного. Наиболее благоприятными объектами, по ряду данных, являются селезенка и лимфоузлы крысы, из которых удается получить нативные полирибосомы, седиментирующие при 250—350S и 160—190S и активно включающие пульсовую аминокислотную метку (Vassalli, 1967; Васильченко и др., 1969). Имеются также сообщения о выделении нативных полирибосом из селезенки кроликов (Becker, Rich, 1966; Scharff, Uhr, 1965) и морских свинок (Николаева, 1976). Из опухолевых тканей наиболее богатым источником полирибосом являются миеломы; в лимфомах количество этих органелл меньше (Sherr, Uhr, 1971a).

В результате усовершенствования техники фракционирования из лимфоидных тканей животных и клеток мышиных плазмоцитом удалось выделить широкий спектр полирибосом с константами седиментации от 118S до 350S. Было показано, что при иммунизации количество полирибосом в полтора-два раза возрастает (Moav, Harris, 1970; Юрин, 1971), а распределение их приобретает специфический бифазный характер. Аналогичные данные на клетках миелом были получены Шубертом (Schubert, 1968) и нами (Сидорова и др., 1973).

Возникло предположение, что бифазное распределение полирибосом, меченных по растущим полипептидным цепям, отражает наличие двух классов полирибосом, участвующих в синтезе Н- и L-цепей. Опытами с иммунопреципитацией полирибосом антисыворотками к Н- и L-цепям действительно было показано, что Н-цепи обнаруживаются только на полирибосомах 270-300S, а L-цепи — преимущественно на полирибосомах 180—190S (Shapiro e. a., 1966a; Askonas, Williamson, 1967b). Согласно проведенным авторами расчетам, такие полирибосомы должны были содержать мРНК, состоящие приблизительно из 1250 и 500 нуклеотидов, т. е. вполне пригодные для кодирования синтеза Н- и L-цепей.

Полученные данные позволили сделать два принципиально важных вывода, а именно: 1) синтез иммуноглобулинов носит моноцистронныи характер и 2) размеры полирибосом и мРНК, участвующих в образовании Н- и L-цепей, вполне достаточны для кодирования синтеза каждой из них как единого целого.

- Читать далее "Синтез тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов. Единый синтез тяжелых и легких цепей антител"


Оглавление темы "Механизмы синтеза антител":
1. Привязанность Vн-генов иммуноглобулинов. Хромосома с генами антител
2. Транслоконы иммуноглобулинов. Объединение V- и С-генов антител
3. Формирование VC-гена иммуноглобулинов. Механизмы объединения V- и С-генов антител
4. Транскрипция VC-гена. Переключение активности генов антител
5. Синтез иммуноглобулинов. Образование антител
6. Плазматические опухоли мышей. Роль полирибосом в биосинтезе иммуноглобулинов
7. Методы выделения полирибосом. Размеры полирибосом синтезирующие антитела
8. Синтез тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов. Единый синтез тяжелых и легких цепей антител
9. Время образования цепей иммуноглобулинов. Избыточный синтез L-цепей антител
10. Роль эндоплазматического ретикулума в синтезе антител. Воспроизведение синтеза антител
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта