Плазматические опухоли мышей. Роль полирибосом в биосинтезе иммуноглобулинов
1. Плазмоцитомы значительно более гомогенны по своему составу, соответственно и продуцируемые ими белки более гомогенны, чем нормальные иммуноглобулины или антитела. Следует отметить, что представления о гомогенности миеломных клеток не нужно абсолютизировать. На самом деле любая плазмоцитома (как и любой клеточный клон) представляет собой совокупность клеток, находящихся на разных стадиях дифференцировки и выполняющих разные функции. По-видимому, и продукты их деятельности неодинаковы.
Так, иммуноглобулины удается обнаружить лишь в 50% клеток плазмоцитомы Х5563 (Rifkind е. а., 1962). Антиидиотипической сывороткой к белку МОРС 315 удается осадить не более 50% секретируемого клетками иммуноглобулина (Sirisinha, Eisen, 1971). В моноклональных компонентах макроглобулина человека обнаружены различия в первичной структуре Н- и L-цепей (Hannestad, Sletten, 1971). Наконец, недавно обнаружены фенотипические изменения миеломных белков (Hausman, Rosma, 1975).
2. Несмотря на то что относительный синтез иммуноглобулинов в миеломных клетках не превышает таковой в селезенке, и особенно в лимфоузлах иммунизированного животного (Becker е. а., 1970), трансплантируемые миеломы позволяют получать значительно большие количества материала для анализа (вес одной опухоли, перевитой под кожу мыши, может достигать 1/3 веса животного, в то время как вес селезенки не превышает 0,2 г).
3. Наконец, в ряде случаев в клетках плазмоцитом активность нуклеаз ниже, чем в селезенке или лимфоузлах иммунизированных животных, а в некоторых из них, по-видимому, даже содержится ингибитор РНКазы, что представляет известные преимущества при фракционировании клеток и выделении из них полирибосом. Все это сделало плазмоцитомы основным объектом при изучении механизмов синтеза и сборки полипептидных цепей иммуноглобулинов.
Роль полирибосом в биосинтезе иммуноглобулинов
Исследования биосинтеза иммуноглобулинов начались с выяснения роли отдельных субклеточных фракций в этом процессе. Подробно история вопроса была нами освещена ранее (Сидорова, 1974), поэтому сейчас мы кратко остановимся лишь на основных полученных при этом результатах.
Уже к середине 60-х годов иммуногистохимическими и электронно-микроскопическими исследованиями было показано, что в клетках, активно продуцирующих иммуноглобулины (в том числе антитела), имеется мощно развитый эндоплазматический ретикулум и содержатся скопления рибосом (до 18-25 в каждом). Наличие иммуноглобулинов в микросомах лимфоузлов иммунизированных животных и миеломных клеток подтверждалось также опытами по прямому фракционированию тканей (Svvenson, КегП, 1967а).
Однако выделить полирибосомы из лимфоидных клеток и продемонстрировать их способность к синтезу иммуноглобулинов in vitro в течение довольно долгого времени не удавалось.
Серьезное изучение механизмов синтеза иммуноглобулинов стало возможным лишь после того, как была разработана техника получения нативных полирибосом. Основные усилия при этом направлялись к уменьшению деградации полирибосом под действием эндогенной РНК-азы.
В некоторых случаях удавалось резко снизить ее влияние за счет чрезвычайно мягких условий гомогенизации ткани, не вызывающих разрушения лизосом и высвобождения ферментов в гомогенат (Becker, Rich, 1966). Однако в большинстве случаев действие РНКазы стараются затормозить добавлением ингибиторов. К числу последних относятся цитоплазматические экстракты из клеток печени или HeLa, полисульфаты и сорбенты — макалоид и бентонит (см. Сидорова, 1974). В последние годы в качестве ингибитора РНКаз все чаще используют гепарин (Schechter, 1974a, b).
Оптимальные результаты достигаются при сочетании мягких условий разрушения тканей с добавлением ингибиторов и максимально быстром проведении фракционирования гомогената при 0° С.
