Механизмы развития синдрома Гиппеля-Линдау. Диагностика синдрома Гиппеля-Линдау
Механизм противоопухолевого действия белки VHL был предметом интенсивных экспериментальных исследований. Установлено, что в норме VHL ингибирует удлинение растущей цепи мРНК путем связывания с белками-факторами элонгации - элонгином В и С [Duan D. et al., 1995]. Таким образом, инактивация VHL сопровождается нарушением контроля транскрипции в клетке. Этот контроль в первую очередь касается генов, экспрессирующихся в условиях гипоксии и кодирующих ангиогенные пептиды — например, эндотелиальный фактор роста, гипоксия-индуцируемый фактор роста-1 и др. [Iliopoulos О. et al., 1996; Maxwell P. et al., 1999].
Предполагается, что именно неадекватно повышенная экспрессия ангиогенных пептидов в результате инактивации VHL лежит в основе формирования сосудистых опухолей, столь характерных для синдрома Гиппеля-Линдау [Iliopoulos О. et al., 1996; Mukhopadhyay D. et al., 1997]. Спектр мутаций, характерных для синдрома Гиппеля-Линдау, весьма широк: он включает крупные делеции всего гена или его части, нонсенс-мутации и мутации со сдвигом рамки, ведущие к преждевременному обрыву трансляции, мутации в сайтах сплайсинга, короткие внутренние делеции и вставки без нарушения рамки считывания, миссенс-мутации в кодирующей области гена [Crossey P. et al., 1994 (б); Richards F. et al., 1994; Chen F. et al., 1995; Zbar B. et al, 1996; Pack S. et al., 1999].
Анализ корреляций генотип-фенотип показал, что миссенс-мутации гена VHL у больных с синдромом Гиппеля-Линдау достоверно чаще сопровождаются развитием феохромоцитомы по сравнению с «инактивиру-ющими» типами мутаций (крупными делециями или мутациями с обрывом трансляции) [Crossley P. et al., 1994 (б); Chen F. et al, 1995; Zbar B. et al., 1996]. Указанная взаимосвязь является настолько значимой, что позволяет с клинико-генетической точки зрения подразделить синдром Гиппеля-Линдау па 2 типа - без клинических проявлений феохромоцитомы и с таковыми (соответственно, тип 1 и тип 2). В 43% случаев синдрома Гиппеля-Линдау с феохромоцитомой (тип 2) обнаруживаются нуклеотидные замены в 238-м кодоне - Arg238Gln и Arg238Tip [Chen F. et al., 1995].
Прямая ДНК-диагностика синдрома Гиппеля-Линдау базируется на SSCP-анализе и тотальном секвеквенировании кодирующей области гена VHL, дополняемыми (с учетом частичных и полных делеций гена) блот-гибридизацией по Саузерну и флюоресцентной гибридизацией in situ [Crossey P. et al., 1994 (6); Pack S. et al., 1999; Hes F. et al., 2000]. При синдроме Гиппеля-Линдау, осложненном феохромоцитомой, в качестве первого шага целесообразно провести прицельное исследование возможных мутаций в 238-м кодоне гена VHL с помощью ПЦР-рестрикционного анализа. При выборе наиболее предпочтительного метода ДНК-анализа и определении прогноза болезни весьма полезным является обширный каталог мутаций VHL и соответствующих фенотипов, составленный В. Zbar с соавторами (1996).
Указанная стратегия молекулярного скрининга позволяет идентифицировать до 80% мутаций в гене VHF у больных синдромом Гиппеля-Линдау [Chen F. et al., 1995; Zbar B. et al., 1996; Pack S. et al., 1999]. У некоторых больных с синдромом Гиппеля-Линдау описан соматический мозаицизм по мутации, в том числе случаи, когда в клетках крови обнаруживались 2 популяции ДНК -нормальная и мутантная [Sgambati M. et al., 2000]. Для выявления данного феномена, существенно влияющего на расчеты риска при медико-генетическом консультировании, могут применяться специальные методы - например, секвенирование отдельных видов клонированной геномной ДНК [Sgambati M. et al, 2000]. ДНК-диагностика имеет большое значение для подтверждения синдрома Гиппеля-Линдау в атипичных случаях с «неполной» клинической картиной заболевания (изолированная гемангиобластома мозжечка и т.д.).
