MedUniver Неврология
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Неврология:
Неврология
Аневризма сосуда мозга
Головная боль
Головокружение
Детская неврология
Комы
Менингит
Поражения ЦНС
Поражения подкорки
Мышечные боли
Лечение в неврологии
Шейный остеохондроз
Рекомендуем:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

ДНК-диагностика аутосомно-доминантных атаксий. Проблемы ДНК диагностики атаксий

При всех формах аутосомно-доминантных атаксий с идентифицированными генами (СЦА типа 1, 2, 3, 6, 7, 8, 10, 12, 17 и ДРПЛА) возможно проведение прямой ДНК-диагностики, основанной на амплификации тринуклеотидного (при СЦА10 пентануклеотидного) участка гена. При электрофорезе продуктов амплификации мутантный аллель четко определяется как патологически удлиненный фрагмент ДНК, содержащий увеличенное (надпороговое) число тринуклеотидных повторов. Для большинства форм атаксий различия между верхней границей нормальных аллелей и нижней границей мутантных аллелей составляют как минимум несколько триплетов (9-12 нуклеотидов и более), в связи с чем качественное электрофоретическое разделение нормальных и мутантных аллелей может проводиться по упрощенному экспpecc-протоколу с использованием агарозного геля.

При необходимости точного количественного определения числа тринуклеотидных повторов разделение продуктов амплификации проводится в полиакриламидном геле, обладающем более высокой разрешающей способностью (альтернативой является использование особой высокоразрешающей агарозы). Это требуется, в частности, при проведении ДНК-диагностики СЦА6, поскольку при данной форме аутосомно-доминантной атаксии разница между нормальными (<18 СAG-повторов) и мутантными аллелями (>21 CAG-повторов) является весьма небольшой и требует точной количественной оценки длины амплифицированных фрагментов гена. В редких случаях при выраженной экспансии тринуклеотидных повторов (более 100 копий) ПЦР-диагностика болезни не представляется возможной; это обусловлено весьма низкой эффективностью амплификации аллелей, содержащих сверхдлинные тринуклеотидные тракты. Такая проблема обычно возникает при анализе гена в ювенильных и ранне-детских случаях доминантных атаксий (особенно СЦА7), обусловленных крайней степенью тяжести мутации.
Выявление указанных сверхдлинных аллелей проводится путем блот-гибридизации геномной ДНК с (САО)-зондами.

Прямая ДНК-диагностика спиноцеребеллярной атаксии 1-го типа
Прямая ДНК-диагностика СЦА1 с помощью радиоавтографии в полиакриламидном геле.
Разрешающая способность геля позволяет устанавливать степень тяжести экспансии повторов с точностью до одного CAG-триплета.
М13 — маркер молекулярной массы; дорожки 1, 2, 6-9, 11-13- носители мутантного гена ATXN1; дорожки 3-5, 10, 14, 15-лица с нормальным числом CAG-повторов в обоих аллелях гена (носительство мутации отвергнуто).

Серьезной проблемой при прямой ДНК-диагностике аутосомно-доминантных атаксий является генетическая гетерогенность данных заболеваний и необходимость «перебора» большого числа генов для выявления мутации в одном из них у конкретного больного. Следовательно, разработка рационального алгоритма генетического скрининга представляет собой важнейшую задачу при обследовании больных и семей с аутосомно-доминантными атаксиями. Такой алгоритм может базироваться на двух основных принципах - анализе клинической картины и сравнительной частоте различных форм атаксий в изучаемой популяции. Те или иные особенности клинического синдрома могут позволить заподозрить конкретную генетическую форму атаксии и начать поиск мутации с анализа соответствующего гена.

Так, наличие у больного с доминантной атаксией экстрапирамидной симптоматики позволяет с высокой вероятностью предположить экспансию CAG-повторов в гене СЦАЗ (болезнь Мачадо-Джозеф), сочетание атаксии с дегенерацией сетчатки требует в первую очередь исследования гена СЦА7 и т.д. Как указывалось выше, однако, большинство случаев аутосомно-доминантных атаксий характеризуются отсутствием каких-либо пато-гномоничных симптомокомплексов, которые могли бы служить надежными опорными пунктами для выбора «пужного» гена. В такой ситуации последовательность анализа генов определяется частотой отдельных генетических форм атаксий. Распределение аутосомно-доминантных атаксий на генетические формы чрезвычайно варьирует в различных странах и географических регионах, однако в целом свыше 70% данных заболеваний в изученных популяциях мира приходятся на СЦА1, СЦА2, СЦАЗ и СЦА6.

В Северной Америке, Японии, Китае и ряде европейских стран (Германия, Португалия, Франция) преобладающей формой является СЦА3/болезнь Мачадо-Джозеф - от 21% до 50% случаев атаксий [Maruyama H. et al, 1995; Ranum L. et al., 1995; Schuls L. et al, 1995; Silveira I. et al., 1996; Tang B. et al., 2000], на Кубе и в Южной Корее ведущей формой является СЦА2 [GispertS. et al., 1993; Kyu JinD. et al., 1999], тогда как в Италии и Великобритании превалирует СЦА1 - от 26%» до 51%о всех семей с аутосомно-доминантными атаксиями [Giunti P. et al., 1994; Pareyson D. et al., 1999]. Таким образом, в каждой конкретной популяции у обследуемых больных с аутосомно-доминантными атаксиями ДНК-диагностику следует начинать с анализа тех генов, мутации в которых являются наиболее частыми в данной популяции.

- Читать далее "Частота доминантных атаксий. Мутации генов при доминантных атаксиях"


Оглавление темы "Причины и диагностика атаксий":
1. ДНК-диагностика аутосомно-доминантных атаксий. Проблемы ДНК диагностики атаксий
2. Частота доминантных атаксий. Мутации генов при доминантных атаксиях
3. Локализация мутаций при доминантных атаксиях. Болезнь Фридрейха
4. Причины болезни Фридрейха. Мутации генов при болезни Фридрейха
5. Диагностика болезни Фридрейха. Пример болезни Фридрейха
6. Клиника болезни Фридрейха. Ранняя диагностика болезни Фридрейха
7. Атаксия при недостатке витамина Е. Причины недостатка витамина Е
8. Эпизодические атаксии. Пароксизмальные атаксии
9. Периодическая вестибуломозжечковая атаксия. Атаксия-телеангиэктазия - синдром Луи-Бар
10. Клиника атаксии-телеангиэктазии. Диагностика синдрома Луи-Бар
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта