Принимая во внимание тот факт, что около 80% всех случаев FIMCH I обусловлены мутациями гена РМР22, обычно ДНК-диагностика НМСН I начинается с исследования именно этого гена и предполагает в первую очередь выявление основной мутации -дупликации области 1,5 мб в локусе 17р 11.2. Наиболее распространенным подходом для этого является исследование числа аллелей высокополиморфных (СА)n-маркеров, входящих в состав дуплицируемого участка [Cudrey С. et al., 1995].
В норме любой маркер имеет по два аллеля (по одному с каждой хромосомы), тогда как в случае дупликации на мутантной хромосоме 1,5 мб-участка общее число аллелей каждого маркера у больного СМТ 1А равно трем. Маркеры амплифицируются в ПЦР, после чего продукты амплификации разделяются с помощью электрофореза в полиакриламидном геле.
Дупликация 17р11.2 диагностируется либо на основании регистрации трех различных ПЦР-продуктов (если все аллели имеют различную длину), либо на основании двойной интенсивности сигнала одной из полос (если два аллеля являются одинаковыми и «накладываются» друг на друга на электрофореграмме). Разновидностью указанного метода анализа полиморфных маркеров из области 17р11.2 является флюоресцентная гибридизация in situ (FISH) с маркерными зондами, позволяющая регистрировать у больных СМТ 1А три пятна от гибриди-зованного флюоресцирующего маркера [Lupski J. et al., 1991].
Существует также ряд других, более сложных в техническом плане подходов для прямой регистрации дупликации критической хромосомной области 17р11.2: а) блот-гибридизация по Саузерну с использованием различных зондов из дуплицируемой области;
б) гель-электрофорез в пульсирующем поле, позволяющий регистрировать изменение подвижности сверхкрупных (дуплицированных) фрагментов ДНК, полученных после рестрикции геномной ДНК и гибридизованных с соответствующими зондами; в) обнаружение (на основе рестрикции и последующей гибридизации) рекомбинантно-го участка в локусе 17р11.2, послужившего источником дупликации [Patel P. et al., 1992; Raeymaekers P. et al., 1992; Timmerman V. et al., 1997].
При отсутствии данных за дупликацию в области 17р11.2 проводится последовательный поиск точковых мутаций в генах РМР22, Р0, Сх32 и ERG2. Порядок исследования генов может варьироваться в зависимости от относительной частоты встречаемости мутаций в них в различных популяциях, а также в зависимости от особенностей генеалогии конкретной родословной: например, при обследовании семьи с подозрением на Х-сцепленный доминантный тин наследования НМСН I в первую очередь должен исследоваться ген Сх32. Для поиска точковых мутаций обычно используются стандартные процедуры скрининга отдельных экзонов (SSCP-анализ, гетеродуплексный анализ и др.) с последующим прямым секвенированием предположительно мутантных образцов ДНК либо тотальное секвенирование всей кодирующей области гена [Nelis E. et al., 1999].
Для диагностики делеции в области 17р11.2 у больных ННППС используются те же методы, что и для выявления дупликации при СМТ 1А. При этом анализ высокополиморфных маркеров (СА) позволяет диагностировать феномен «потери гетерозиготпости» у больного родителя и отсутствие родительского аллеля у больного ребенка. Диагностика делеции возможна также на основании прямого обнаружения половинной дозы гена РМР22 (например, при блот-гибридизации геномной/амплифицированной ДНК или количественном определении ПЦР-продукта участка гена с использованием автоматического секвенатора). Нейрогенетическим отделением НИИ неврологии РАМН проведен молекулярно-генетический анализ большой серии рецидивирующих невоспалительных невропатий на основе исследования гена РМР22.
Полученные нами результаты свидетельствуют о том, что делеция РМР22 обусловливает около 30% случаев рецидивирующих невропатий различной локализации и более половины семейных форм данных заболеваний (в том числе при семейной невропатии лицевого нерва). Принимая во внимание сложность дифференциальной диагностики ННППС с другими формами наследственных невропатий, а также несомненно существующую недооценку распространенности ННППС, можно сделать вывод о том, что прямая ДНК-диагностика является ключевым методом исследования и позволяет в абсолютном большинстве случаев безошибочно диагностировать ННППС, не прибегая к необходимости проведения такой инвазивной процедуры как биопсия нерва.
ДНК-диагностика должна применяться не только у больных, но и у их клинически здоровых родственников из группы риска, поскольку заболевание может иметь стертое и асимптомное течение. Больным со своевременно диагностированной ННППС необходимо рекомендовать соответствующую коррекцию стиля жизни, физических нагрузок и профессиональной ориентации, что имеет решающее значение для профилактики необратимых и инвалидизирующих осложнений данного заболевания. ДНК-диагностика ННППС позволяет избежать необоснованного направления больного к хирургу, поскольку оперативное лечение, являющееся в ряде случаев наиболее эффективным и радикальным методом терапии обычных туннельных компрессионных синдромов, при НПППС неэффективно и лишено смысла.
