Современные рекомбинантные субъединичные вакцины. Практика применения рекомбинантных субъединичных вакцин.
Живые вакцины против краснухи весьма эффективны, однако их реактогенность, особенно для беременных женщин, побудила к созданию новых средств специфической профилактики краснухи. Новая стратегия основывалась на создании компонентных вакцин на основе рекомбинантной ДНК-технологии. Получена субъединичная вакцина, которая включает белок Е1, содержащий главные нейтрализующие эпитопы.
Клетки куриного эмбриона, трансфицированные геном HN вируса Ньюкаслской болезни в составе вектора из вируса саркомы Рауса, стабильно экспрессировали белок HN на клеточной поверхности; адсорбировали эритроциты кур и проявляли нейраминидазную активность. Трансфицированные HN-клетки проявляли резистентность к суперинфекции вирусами ньюкаслской болезни и гриппа, связывающимися с рецепторами, содержащими сиаловую кислоту, но были чувствительны к заражению вирусом везикулярного стоматита.
Протективный поверхностный гликопротеин D вируса простого герпеса, экспрессируемый и секретируемый клетками СНО, вызывал синтез нейтрализующих антител и защиту мышей от заражения летальной дозой вируса. Обработка морских свинок гликопротеином вместе с адъювантом предупреждала развитие латентной инфекции ганглиев и оказывала терапевтический эффект, снижая количество и тяжесть вирусиндуцированных повреждений.
Субъединичные вакцины, содержащие HN и F гликопротеины вируса ПГ-3, получены из очищенного вируса или в культуре клеток насекомых, инфицированных рекомбинантным бакуловирусом, экспрессирующим HN и F белки, или химерным вирусом.
Рекомбинантная субъединичная вакцина против лейкоза кошек в качестве антигена содержала негликозилированный гликопротеин оболочки вируса лейкемии кошек подгруппы А. Такой рекомбинантный белок включал белок оболочки (гликопротеин 70 кД) и первые 34 аминокислоты трансмембранного белка Р15Е. Вакцина представляла собой очищенный белок, адсорбированный на гидроокиси алюминия, и содержала сапонин. У вакцинированных кошек образовывались вируснейтрализующие антитела и развивалась анамнестическая реакция на введение вируса лейкемии кошек. Иммунизированные животные были защищены от вирусной инфекции.
Постоянные линии клеток имеют важные преимущества в качестве субстратов для производства рекомбинантных субъединичных вакцин. Поскольку такие клетки являются естественным хозяином вирусов млекопитающих и птиц, синтезируемые в них рекомбинантные вирусные белки во всех отношениях подобны природным вирусным антигенам. Выделение и очистка таких антигенов отличаются быстротой и экономичностью. Наработка протективных вирусных антигенов в эукариотических системах, по-видимому, является наиболее приемлемым процессом, так как вирусные антигены экспрессируются на клеточной поверхности в сочетании с антигенами гистосовместимости хозяина, обеспечивая, тем самым, наряду с гуморальным иммунным ответом, и эффективный клеточный ответ. Основной недостаток таких клеточных систем — потенциально существующая опасность их возможной онкогенности.
По мнению авторитетных специалистов, клиническая оценка безопасности антигенов, полученных при использовании клеточных линий и рекомбинантных векторов, содержащих фрагменты трансформирующих вирусов, является условной. Однако существующие методы очистки антигенов от клеточной и вирусной ДНК, а также других продуктов метаболизма, дают возможность получить препараты, отвечающие существующим требованиям, и практически снимают ограничения с использования постоянных линий клеток.
Для экспрессии чужеродных вирусных белков широко используют перевиваемые линии клеток насекомых под контролем бакуловируса в качестве вектора. Таким путем были экспрессированы НА вируса гриппа, протективный антиген вируса гепатита Е, а так же белки других вирусов. Клетки млекопитающих широко используют для получения протективных вирусных белков, которые пригодны для приготовления субъединичных вакцин. Этот способ может быть использован для приготовления вакцин, когда вирус не размножается в культуре клеток (вирус гепатита В, парвовирус В19, вирус Норволк), или в случае, когда изготовление цельновирионной инактивированной вакцины представляет биологическую опасность (некоторые лентивирусы, филовирусы, хантавирусы и аренавирусы человека).
Для крупных вирусов, таких как вирусы герпеса, которые кодируют около 10 протективных антигенов, может оказаться необходимым использовать для вакцины смесь нескольких экспрессированных белков.
