Виды применяемых субъединированных вакцин. Особенности изготовления субъединированных вакцин.
Гликопротеиновый комплекс вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней выделяли из вирионов с помощью ультразвука и отделяли от остальных вирусных компонентов с помощью изопикнического центрифугирования. Субъединичный препарат при внутримышечном введении в дозе 1 мкг гликопротеинов защищал поросят при заражении вирулентным штаммом вируса. У вакцинированных поросят развивался гуморальный иммунный ответ.
Гликопротеин G оболочки вируса бешенства — единственный белок, ответственный за индукцию вируснейтрализующих антител и формирование проективного иммунитета. Высокоочищенные препараты гликопротеина получали при обработке вируса бешенства нонидетом Р-40, три-п-бутилфосфатом или бромелином. Препараты очищенного гликопротеина G вызывали образование нейтрализующих антител у кроликов и защищали мышей от летальной инфекции при интрацеребральном введении вирулентного вируса.
Развитие протективного иммунитета при иммунизации очищенным белком G происходило медленнее, чем при введении цельного вируса бешенства, хотя степень защиты от летальной инфекции была одинаковой для обоих препаратов. В отличие от цельных вирионов, субвирионный препарат не обладал гемагглютинирующей активностью.
Исследования с вирусом везикулярного стоматита показали, что при обработке вирионов трипсином разрушается их способность инцудировать образование нейтрализующих антител. Иммунизирующий антиген может быть извлечен из вируса посредством обработки его твином или нонидетом Р-40, либо дезоксихолатом натрия.
Однократная иммунизация гликопротеинами поверхности вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей защищала 70% мышей от летальной инфекции вирулентным штаммом, а двукратная иммунизация гликопротеинами обеспечивала 100%-ную защиту от заражения. Субъединичная вакцина, приготовленная из очищенных гликопротеинов вируса клещевого энцефалита, была сравнима по иммуногенности и протективным свойствам с цельновирионной формолвакциной.
Вакцина из гликопротеина Е вируса японского энцефалита по иммуногенности уступала цельновирионной инактивированной вакцине.
Субъединичные вакцины привлекли внимание исследователей, занимающихся специфической профилактикой лейкоза кошек. Вакцинация кошек с последующей ревакцинацией субъединичной вакциной против лейкоза кошек (Leucocell), включающей антигены подтипов А, В и С и мембранный антиген онкорнавируса кошек, защищает животных от развития инфекции при последующем заражении их вирулентным штаммом вируса лейкоза кошек. Спустя 2—4 года после вакцинации и заражения еженедельная инъекция животным метилпреднизалона (7,5 мг/кг) не вела к реактивации вируса в культуре клеток костного мозга. Указанная вакцина предотвращала латентную инфекцию вирусом лейкоза кошек даже на фоне иммуносупрессии. Она хорошо защищает кошек от персистентной виремии и возникновения опухолей.
Кошек иммунизировали иммуностимулирующим комплексом, приготовленным на базе оболочечного гликопротеина вируса лейкоза кошек gp70 и трансмембранного белка вируса р15Е, или коммерческой субъединичной вакциной из вируса лейкоза кошек Leucocell. Оба препарата содержали сопоставимые количества белка gp70. Животных иммунизировали трижды и наблюдали в течение 200 дней. За этот период животные оставались здоровыми, а попытки выделить от них вирус были безуспешными. По сравнению с коммерческой вакциной, вакцина на основе ИСКОМ во всех случаях индуцировала сероконверсию и более высокие титры антител, выявляемых ИФА, или в нейтрализации. Методом иммуноблоттинга подтверждено формирование специфических антител, реагирующих с белками gp70 и р15Е.
Флавивирусные инфекции сопровождаются образованием антител как к структурным, так и к ассоциированным с клетками вирусспецифическим неструктурным белкам; К последним относится gp48, известный как N51-белок — большой комплементсвязывающий антиген, существующий либо в связанном с клетками виде, либо в растворимой форме.
Очищенный белок NS1 вируса желтой лихорадки получали из лизатов инфицированных клеток Vero методом аффинной хроматографии с использованием в качестве лиганда анти-NSl моноклональных антител. Интраперитониальное введение мышам 15 мкг NS1 дважды с интервалом две недели вызывало образование антител и создавало 100%-ную защиту животных от внутрикожного заражения летальной дозой вируса.
Иммунизация обезьян резус NSl-белком дважды (100 мкг внутрикожно и 500 мкг подкожно) вела к появлению в крови антител в титре 1:64 — 1:256 и NSl-антител и предотвращала летальный исход после заражения вирулентным штаммом вируса желтой лихорадки. Механизм защитного эффекта NSl-белка обусловлен комплементопосредственным иммунным цитолизом клеток, несущих поверхностный NS1-антиген. Этот механизм защиты возможен и у других флавирусов. Иммуногенность очищенного структурного Е-белка (33 кД) вируса желтой лихорадки оказалась менее выраженной. Интересным продолжением описанных примеров может служить получение субъединиц из безоболочечных вирусов и использование соответствующих препаратов для вакцинации. Субъединичные вакцины, содержащие очищенные гексоны аденовируса типа-5, обладали выраженной антигенностью и оказались нереактогенными для людей.
Субъединичную (VP1) и цельновирионную инактивированную вакцины против ящура оценивали на морских свинках. Для создания одинакового эффекта в субъединичной вакцине, должно содержаться значительно больше антигена, чем в цельновирионной. Заключенный в липосомы вирионный белок (VP 1) или цельные инкативированные вирионы обладали большей антигенностью, чем те же иммуногены с полным адъювантом Фрейнда.
Субъединичная вакцина, содержащая капсидные белки VP1, 2, 3 и, по-видимому, VP4 вируса энцефаломиокардита в дозе >16 нг, защищала мышей от гибели при экспериментальном заражении.
Белок Р-2 вируса катаральной лихорадки овец в препаративных количествах выделяли обработкой вирионов моновалентными или двухвалентными солями. При такой обработке сохранялись иммунологическая специфичность Р-2. 50 мкг белка Р-2 было достаточно для индукции у овец преципитирующих и нейтрализующих антител. Вакцинированные белком Р-2 овцы оказались защищенными против вирулентного штамма вируса. Однако неясно, почему пустые капсиды ротавируса крупного рогатого скота, содержащие иммунодоминантный белок VP7, были неспособны к индукции вируснейтрализующих антител у крупного рогатого скота.
Субъединичная (плазменная) вакцина против гепатита В после трехкратного введения вызывала образование защитного уровеня aHTH-HBs-а'нтител у 87-95% вакцинированных. В дальнейшем эта вакцина была заменена реком-бинантной субъединичной вакциной, HBsAg для которой синтезирован в дрожжах.
