MedUniver Микробиология
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Микробиология:
Общая микробиология
Общая бактериология
Экология микробов
Учение об инфекции
Лечение инфекций
Иммунология
Методы диагностики
Грам "+" бактерии
Грам "-" бактерии
Микобактерии
Хламидии. Риккетсии
Спирохеты. Трепонемы
Вирусы
Грибы
Простейшие
Гельминтозы
Санитарная микробиология
Книги по микробиологии
Рекомендуем:
Необходимое:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Опыт культивирования вирусов в суспензиях постоянных линий клеток. Технологии в вирусологии.

Вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней (ТГС) выращивали в циклической суспензионной культуре постоянной линии клеток почки поросенка ППК-66. При оптимальных условиях (концентрация клеток 1,5-2,5 млн/мл; множественность заражения 1- 10 ТЦД50/мл; продолжительность культивирования после инфицирования 24-30 ч; содержание сыворотки в среде - 5-10%; рН - 7,2-7,4; скорость перемешивания суспензии 120-200 об/мин и аэрация со скоростью 0,2-1 л/ч на литр среды) вирус накапливался в титре 108,5-109,0ТЦД50/мл и в 100 раз превышал накопление вируса в однослойной статической культуре тех же клеток. Титры антител в крови кроликов, двукратно иммунизированных инактивированной вакциной, были значительно выше при ее приготовлении из вируса, размноженного в суспензионной, чем в однослойной культуре клеток. Установлено, что суспензионная культура клеток ППК-66 является высокопродуктивной системой для крупномасштабного производства вакцинного штамма вируса ТГС.

Аналогичные данные получены при выращивании вируса болезни Ауески в суспензионных культурах клеток ППК-666 и ВНК-21. Накопление вируса в суспензии (108,5- 109,0 ТЦД50/мл) было выше, чем в монослое. В обоих случаях для выращивания вирусов трансмиссивного гастроэнтерита и болезни Ауески в суспензии клеток использовали среду с ФГМ и 10% сыворотки крупного рогатого скота.

Накопление вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей в клетках L, выращенных в суспензии, было таким же, как и в однослойной культуре. Однако выход вируса на одну клетку в суспензии был ниже, чем в монослое, и в среднем достигал 1000 ЛД50/мл. Респираторно-синцитиальный вирус размножали в суспензии клеток НЕр2 и МА-160. Вирусную суспензию смешивали с клеточным осадком (М-5), добавляли среду Игла с 10% сыворотки телят до концентрации клеток 2—3x105 мл. Через 48 ч вирус достигал титра 7,0 lg ТЦД50/мл. Высокая иммуногенность препарата, инактивированного формалином (1:2000), явилась основанием для разработки метода выращивания вируса в суспензионной культуре в ферментерах.

Вирусы полиомиелита трех типов хорошо размножались в суспензии лимфобластоидных клеток человека в бессывороточной среде. Данная клеточная система открывает новые возможности получения больших количеств вируса для промышленного изготовления вакцины. Линии лимфоидных клеток (JMV-I и MSB-I), полученные от зараженных вирусом болезни Марека цыплят, поддерживали репликацию вируса ньюкаслской болезни, что сопровождалось цитолитическим действием.

строение ротовирусов в культуре

Хемостатные суспензионные культуры представляют возможность для увеличения производительности при репродукции вирусов по сравнению с обычными циклическими суспензионными культурами. Выбор системы непрерывно-проточного культивирования зависит от особенностей вируса и чувствительного клеточного субстрата. Вирусы, реплицирующиеся без цитопатического эффекта и без выраженного снижения скорости роста клеток, могут размножаться в системе одноступенчатого хемостата. Вирусы, вызывающие литическую инфекцию, необходимо культивировать во второй ступени хемостата, а клетки-продуценты — в первой. Преимущество хемостатной системы состоит также в непрерывном удалении образовавшегося продукта. В одноступенчатом хемостате культивировали вирус краснухи в клетках HeLa и ВНК-21. Отмечено, что в течение 40 дней непрерывной работы хемостата поддерживался титр продуцируемого вируса и комплементсвязывающего антигена. С увеличением скорости роста клеток увеличивалась репродукция вируса.

Полиовирус, вызывающий литическую инфекцию, размножали в клетках HeLa в одноступенчатом хемостате (лизостате), а аденовирус — в двухступенчатой системе. Однако эти попытки не дали четких результатов.

Для культивирования клеток в суспензии предложен (1998 г.) качающийся биореактор (Wave bioreactor), представляющий собой пластиковую эластичную емкость (мешок), содержимое которого перемешивается с помощью плавного покачивания в вертикальной плоскости на специальной качалке.

Пластитковый биореактор стерилизуется гамма-лучами. При культивировании клеточной суспензии в объеме > 10 л, используют аэрацию с автоматизированным контролем рН 02 и С02.

Перспектива использования постоянных линий клеток для выращивания вирусов с целью изготовления вакцин привела к необходимости выяснить опасность таких препаратов. Прежде всего, это было связано с клетками ВНК-21 и противоящурной вакциной. Онкогенность клеток ВНК-21 для хомяков хорошо известна. Предстояло выяснить онкогенность их для домашних животных, прививаемых против ящура. Во-первых, было установлено, что у хомяков опухоли вызывают только нативные клетки ВНК-21, тогда как различные культуральные бесклеточные субстраты этой способностью не обладают. Во-вторых, у других видов животных (крупный рогатый скот, овцы, свиньи, крысы, кролики, морские свинки и мыши) клетки ВНК-21 не вызывали опухолей.

Постоянный технический комитет экспертов Европейской комиссии по борьбе с ящуром ФАО рекомендовал клетки ВНК-21 для изготовления вакцины, признав их безопасными для сельскохозяйственных животных. Многолетняя практика применения ВНК-вакцины против ящура подтвердила правильность этой рекомендации. Возможность применения других линий клеток в изготовлении противовирусных вакцин, предназначенных животным, должна основываться на соответствующих экспериментальных данных.

Анализ имеющихся данных показывает, что выращивание вирусов в суспензии постоянных линий перевиваемых клеток все более привлекает внимание исследователей в связи с решением различных научных и практических вопросов. Для некоторых вирусов разработаны технологические режимы массового размножения в клеточных линиях с использованием металлических реакторов большой емкости. Одни и те же клеточные субстраты можно с успехом применять для размножения разных вирусов. Например, технология культивирования клеток ВНК-21, разработанная в связи с изготовлением противоящурной вакцины, имеет прототипное значение и может быть применена для размножения многих вирусов человека и животных. Разработка таких технологий массового культивирования постоянных линий клеток многоцелевого назначения представляет огромный практический интерес. Актуальной задачей является создание банка охарактеризованных постоянных линий клеток, отличающихся высокой ростовой потенцией, стабильностью свойств при серийном суспензионном культивировании в промышленных условиях и высокой продуктивностью для различных вирусов.

- Читать далее "Вирусные антигены. Виды антигенов у вирусов."


Оглавление темы "Культивирование вирусов. Антигены вирусов и иммуннитет.":
1. Культуры клеток на микроносителях. Применение культуры клеток на микроносителях в вирусологии.
2. Суспензии постоянных линий клеток. Размножение вирусов в суспензии постоянных линий клеток.
3. Особенности суспензий постоянных линий клеток. Выращивание вирусов в суспензии постоянных линий клеток.
4. Опыт культивирования вирусов в суспензиях постоянных линий клеток. Технологии в вирусологии.
5. Вирусные антигены. Виды антигенов у вирусов.
6. Ответ организма на антигены вируса. Антитела на антигены вируса.
7. Нейтрализирующие антигенные участки вируса. Гликопротеины вируса.
8. Тип репродукции вируса и его антигенный состав. Инфекционность и тип репродукции вируса.
9. Противовирусный иммунитет. Вирусы и иммунная система.
10. Структура иммунной системы. Организация иммунной системы.
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта