MedUniver Микробиология
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Микробиология:
Общая микробиология
Общая бактериология
Экология микробов
Учение об инфекции
Лечение инфекций
Иммунология
Методы диагностики
Грам "+" бактерии
Грам "-" бактерии
Микобактерии
Хламидии. Риккетсии
Спирохеты. Трепонемы
Вирусы
Грибы
Простейшие
Гельминтозы
Санитарная микробиология
Книги по микробиологии
Рекомендуем:
Необходимое:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Суспензии постоянных линий клеток. Размножение вирусов в суспензии постоянных линий клеток.

Для одних целей предпочтительнее использовать клетки, растущие на поверхности субстрата, для других — клеточные суспензии. Даже первые несовершенные исследования по культивированию вирусов в суспензиях постоянных линий клеток показали перспективность этого метода для получения вирусов в больших количествах.

За сравнительно короткий период выращивание вирусов животных в суспензиях клеток достигло впечатляющих успехов. Большие достижения в этой области связаны, прежде всего, с технологией выращивания вируса ящура в суспензии клеток ВНК-21. Ввиду высокой чувствительности ко многим вирусам и потенции роста клетки ВНК-21 получили широкое применение. Внимание многих исследователей было обращено на разработку методов массового выращивания этих клеток. Возможность автоматического регулирования рН, аэрации, температуры, а также усовершенствование питательных сред создали предпосылки для суспензионного культивирования клеток ВНК-21 в реакторах большой емкости.

В 1962 г. Кэпстик и сотрудники впервые сообщили о выращивании клеток ВНК-21 в суспензии без ослабления их чувствительности к вирусу ящура. Затем было установлено, что вирус ящура, размноженный в суспензии клеток ВНК-21, вполне пригоден для получения инактивированной вакцины.

вирус в суспензии линии клеток

Полученные результаты стали основанием для разработки промышленной технологии культивирования клеток ВНК-21 с целью изготовления инактивированной противоящурной вакцины.

Дальнейшие исследования показали, что вирус максимально накапливался при 35°С. С повышением температуры ускорялась гибель клеток, а при ее снижении до 34—25°С ослаблялась репродукция вируса. Максимальный титр наблюдался при рН 7,2, снижение или повышение рН до 6,8 и 7,8 подавляло размножение вируса. Повышение концентрации клеток в пределах 1,0—9,0 млн/мл заметно не влияло на титр вируса, хотя при этом активность КС-антигена повышалась. Концентрация клеток в пределах 2,0—2,5 млн/мл обеспечивала накопление вирусного антигена, необходимого для изготовления эффективной вакцины, что было подтверждено в опытах на крупном рогатом скоте.

Для получения максимального выхода вируса множественность заражения (М) должна быть не менее 0,003. Время достижения пика инфекционности вируса при М = 0,003— 1,0 существенно не изменялось. Добавление к питательной среде 5% сыворотки крупного рогатого скота вело к увеличению выхода вируса и КС-антигена в 3—10 раз, чего не наблюдали при выращивании вируса ящура в однослойной культуре клеток ВНК-21. Однако некоторые партии сывороток содержали неспецифические ингибиторы, снижающие накопление вирусного антигена на 50%. Применение сыворотки лошади давало возможность избежать подавления размножения вируса.

Для производства противоящурной вакцины клетки ВНК-21 выращивали в металлических аппаратах в течение 50 ч до концентрации 2-2,5 млн/мл. После осаждения клеток методом отстоя (в течение 18—24 ч при 15°С) 90% ростовой среды заменяли средой с 5% сыворотки телят. Для заражения клеточной суспензии в объеме 100 л (численность популяции 2x1011 клеток) было достаточно внести 1 л адаптированного культурального вируса с титром Ю8'5—109'0 БОЕ/мл. В процессе культивирования большинство клеток разрушалось в результате ЦПД вируса. При изготовлении вакцины вирусную суспензию осветляли фильтрованием вначале через крупнопористый фильтр, затем через нитро-целлюлозную мембрану (диаметр пор 0,2 мкм). Вирус инактивировали 0,05%-ным ацетилэтиленимином в течение 30 ч при 25°С (рН 7,6).
Приготовленная таким образом вакцина обладала выраженной иммуногенностью.

Французские исследователи выращивали клетки ВНК-21 в реакторах из нержавеющей стали емкостью 100 л. Автоматическое поддержание рН на оптимальном уровне способствовало росту культуры, популяция которой увеличивалась в 7-8 раз в течение 72—96 ч. В выросшей культуре заменяли 90% ростовой среды поддерживающей средой (среда Игла, гидролизат лактальбумина и дрожжевой экстракт), вносили вирус и суспензию, перемешивали (400 об/мин). Они установили, что повышение концентрации клеток в суспензии выше 2x106 мл не повышает титра вируса. Наивысшее накопление КС-антигена отмечено при концентрации клеток в суспензии 107 мл. Хранение суспензии клеток при 6°С в течение семи дней практически не отражалось на их способности к репродукции вируса ящура.

Инактивированные вакцины, приготовленные из вируса ящура, выращенного в суспензии клеток ВНК-21 (концентрация клеток 2,5 млн/мл) и по методу Френкеля, оказались аналогичными по иммуногенности.

В 1971 г. восемь ящурных лабораторий, расположенных в Англии, Кении, Аргентине, Уругвае, Бразилии, Парагвае, Испании и Германии использовали суспензию клеток ВНК-21 для промышленного изготовления противоящурной вакцины. Ежегодно эти лаборатории производили свыше 200 млн доз моновалентной вакцины. Клетки и вирус выращивали в реакторах емкостью 2000 л при контролируемых условиях (температура, рН и аэрация). Для изготовления вакцины использовали коллекцию из 100 адаптированных штаммов, представляющих 33 иммунологических варианта вируса ящура. Большинство из этих штаммов обладали высокой иммуногенностью и хорошо размножались в суспензионной культуре клеток ВНК-21.

- Читать далее "Особенности суспензий постоянных линий клеток. Выращивание вирусов в суспензии постоянных линий клеток."


Оглавление темы "Культивирование вирусов. Антигены вирусов и иммуннитет.":
1. Культуры клеток на микроносителях. Применение культуры клеток на микроносителях в вирусологии.
2. Суспензии постоянных линий клеток. Размножение вирусов в суспензии постоянных линий клеток.
3. Особенности суспензий постоянных линий клеток. Выращивание вирусов в суспензии постоянных линий клеток.
4. Опыт культивирования вирусов в суспензиях постоянных линий клеток. Технологии в вирусологии.
5. Вирусные антигены. Виды антигенов у вирусов.
6. Ответ организма на антигены вируса. Антитела на антигены вируса.
7. Нейтрализирующие антигенные участки вируса. Гликопротеины вируса.
8. Тип репродукции вируса и его антигенный состав. Инфекционность и тип репродукции вируса.
9. Противовирусный иммунитет. Вирусы и иммунная система.
10. Структура иммунной системы. Организация иммунной системы.
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта