MedUniver Микробиология
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Микробиология:
Общая микробиология
Общая бактериология
Экология микробов
Учение об инфекции
Лечение инфекций
Иммунология
Методы диагностики
Грам "+" бактерии
Грам "-" бактерии
Микобактерии
Хламидии. Риккетсии
Спирохеты. Трепонемы
Вирусы
Грибы
Простейшие
Гельминтозы
Санитарная микробиология
Книги по микробиологии
Рекомендуем:
Необходимое:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Смена вирусной культуральной среды. Изменения вирусов при смене среды.

При смене хозяина наиболее часто происходит маскирование антигенных сайтов в процессе гликозилирования. В молекуле гемагглютинина вирусов гриппа А и В выявлено около 30 сайтов гликозилирования, поэтому селекция различных биологических вариантов вируса, отличающихся от исходной популяции, неизбежна при каждой смене хозяина. Индуцируемые клетками хозяина различия в гликопротеинах отмечены у вируса простого герпеса. В гликопротеинах ВГП-1, размноженного в культурах NBL L или Vero и ВНК-21, выявлены существенные количественные и качественные различия. Это дало основание заключить, что олигосахаридный процессинг гликопротеинов ВПГ-1 может варьировать в культурах клеток различных млекопитающих. Кроме того, при серийном размножении в различных линиях клеток наблюдали дивергенцию дочерних популяций ВПГ-1 по меньшей мере по одному параметру (антигенность, нейровирулентность, способность к латенции и реактивации) в результате селективного отбора.
Популяции вируса гриппа, адаптированные к размножению в постоянной линии клеток МДСК и на куриных эмбрионах, отличались между собой антигенными свойствами.

Адаптация вируса гепатита А к культуре клеток сопровождается нуклеотидными делециями в гене, кодирующем белок VP1. После 60 пассажей в культуре клеток обнаружено 18 нуклеотидных делеций, обусловливающих замещение минимум шести аминокислот в белке. Заметное влияние на продукцию вирусов оказывает фаза роста клеток и возраст культур. Зависимость размножения от фазы роста клеток наиболее выражена у парвовирусов, которые в силу особенностей репликации размножаются эффективно лишь в культурах делящихся клеток. Для этого необходимы, по-видимому, средняя и поздняя стадия S-фазы клеточного цикла. При создании оптимальных условий удалось наблюдать образование бляшек парвовирусом свиней в постоянной линии клеток почки эмбриона свиньи. Вирус вносили во флаконы с культурой через 3 ч после высева клеток (400—600 тыс. в 1 мл) и спустя восемь дней инкубации наблюдали образование бляшек диаметром 0,5-3,5 мм. Максимальное количество бляшек появилось при адсорбции вируса в течение 90 мин и дозе вируса около 30 БОЕ в 0,2 мл.

Добавление декстрана (50 мкг/мл) в среду покрытия способствовало образованию бляшек. Эклипсфаза размножения парвовируса свиней составляла 8—10 ч. Экстрацеллюлярный вирус обнаруживали через 16 ч. Гемагглютинин появился через 10 ч, а вирусный антиген в ядре и цитоплазме был выявлен МФА через 8—12 ч. В растущих культурах выход многих вирусов больше, чем в культурах в стационарной фазе роста. Например, в активной растущей культуре репродукция респираторно-синцитиального вируса возрастала в 20—60 раз по сравнению с выросшей, тогда как вирус парагриппа накапливался одинаково в обеих культурах. Продукция ВИЧ в неразмножающейся культуре с высокой плотностью популяции клеток (линия Molt-4) была значительно выше, чем в растущей с низкой плотностью.

культуры вирусов

Некоторую специфику представляют культуры дифференцирующихся клеток. Чувствительность лейкоцитов, претерпевающих бласттрансформацию в процессе выращивания, может изменяться в отношении некоторых вирусов. Например, лейкоциты телят через 5—7 дней культивирования оказались наиболее чувствительными к вирусу чумы крупного рогатого скота. Лейкоциты человека после культивирования приобретали чувствительность к вирусу ньюкаслской болезни, тогда как в свежевыделенных клетках вирус не размножался. Эндотелиальные клетки человека были пермиссивными для полиовируса человека после четырех суток культивирования, что во многом зависело от экспрессии полиовирусных рецепторов на клеточной поверхности. Чувствительность полипотентных стволовых клеток костного мозга человека к парвовирусу В19 возрастает по мере их дифференциации в культуре. Однако первичная культура клеток гепатоцитов утят была компетентной к заражению вирусом гепатита В уток только в первые четыре дня культивирования. Для усиления репродукции вирусов в культурах гемопоэтических клеток прибегали к стимуляции бласттрансформации.

В качестве митогена чаще всего использовали фитогемагглютинин (ФГА), стимулирующий размножение некоторых вирусов в лейкоцитарных культурах. Аналогичным действием обладал диметилсульфоксид в линии клеток лейкоцитов человека (HL-60), инфицированной вирусом гриппа, и в культуре клеток почки кролика (PKI3), инфицированной вирусом ринотрахеита крупного рогатого скота. Накопление вируса в культуре может зависеть от особенностей клеточной сублинии, а также используемого вирусного штамма и степени его адаптации.

При инфицировании вирусом выросших культур часто используют поддерживающие питательные среды, отличающиеся от ростовых сред тем, что не содержат сыворотки или, кроме того, имеют более простой состав.
Кроме неорганических солей существенным компонентом для максимального накопления вируса является глюкоза.

Относительно влияния источников азотистого питания и других факторов на урожай вирусов имеются противоречивые сведения. Известно, что вирус может размножаться в клетках при полной остановке синтеза клеточных компонентов путем исключения необходимых субстратов из состава среды. Однако для максимального накопления вирусов в культуре могут требоваться различные органические добавки к солевому раствору.

Присутствие глютамина (0,03%) и глюкозы (0,2%) в сбалансированном солевом растворе обеспечивало высокое накопление вируса ящура в клетках ВНК-21 (10 БОЕ/мл), тогда как добавление сыворотки и других органических компонентов не увеличило выход вируса. Максимальный урожай полиовируса в культуре клеток почек обезьян получен в присутствии глюкозы и цистина, а в культуре клеток HeLa — при наличии в среде глюкозы и глютамина. Возможно, что разные клетки могут иметь различные потребности в питании для максимального синтеза одного и того же вируса. Это также может быть связано со скоростью размножения вируса. Казалось, что чем сложнее вирусы и чем медленнее они размножаются, тем они более требовательны к питательным субстратам среды, чем мелковирионные, просто устроенные и быстро реплицирующиеся вирусы.

Добавление смеси аминокислот к раствору Хенкса увеличивало титр вирусов ньюкаслской болезни и болезни Ауески на 1,5—2,0 lg, но не оказывало влияния на накопление вируса ящура. Обогащение поддерживающей среды питательными субстратами на 1,0—1,5 lg повышало выход вируса клещевого энцефалита и везикулярного стоматита. Для нормального синтеза инфекционных частиц вирусов герпеса и осповакцины необходимо присутствие в среде аргинина, а для вируса чумы собак — метионина. Исключение различных аминокислот из среды Игла (MEM) сопровождалось различным снижением уровня накопления вируса ньюкаслской болезни. Однако синтез инфекционных вирионов полностью прекращался лишь в отсутствие в среде аргинина. При этом синтез вирусспецифических компонентов не останавливался, хотя гемадсорбция заметно подавлялась. Возможно, что аргинин играет важную роль в синтезе белка, участвующего в сборке и созревании этого вируса.

- Читать далее "Температурный режим культивирования вирусов. Накопление вируса в среде."


Оглавление темы "Методология выращивания вирусов.":
1. Выращивание вирусов. Методика выращивания вирусов.
2. Факторы влияющие на размножение вирусов. Размножение вирусов в культуре.
3. Особенности культирования вирусов гепатита. Культивирование вируса гриппа.
4. Культуры диплоидных клеток. Адаптирование вирусов к культуральным средам.
5. Смена вирусной культуральной среды. Изменения вирусов при смене среды.
6. Температурный режим культивирования вирусов. Накопление вируса в среде.
7. Протеолитическая активация вирусов. Многофакторность размножения вирусов.
8. Однослойная культура клеток для вирусов. Размножение вирусов в однослойной культуре.
9. Применение однослойных клеточных культур. Выращивание вируса в однослойной культуре.
10. Выращивание вируса во вращающейся колонне. Культивирование вирусов для производства вакцин.
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта