Особенности культирования вирусов гепатита. Культивирование вируса гриппа.
В первичной культуре клеток почки эмбриона человека способностью поддерживать репродукцию цитомегаловируса человека обладают клетки, которые, вероятно, являются клетками-мишенями в организме хозяина. Культуры клеток астроцитов из мозга плода человека обеспечивают размножение нейрот-ропного полиомавируса человека JCV и могут быть многократно пассированы без потери фенотипа астроцитов и снижения чувствительности к вирусу. Для реактивации вируса простого герпеса 1 (ВПГ-1) использовали эксплантаты кожи и подкожной ткани подушечек задних лап мышей, взятых через 6 мес после инфицирования.
В процессе культивирования эксплантатов происходила реактивация вируса. Фокусы реактивации латентного вируса обнаруживали гибридизацией in situ, начиная с 5—6-го дня. По мере культивирования количество клеток и содержание в них вирусспецифических нуклеиновых кислот возрастали.
Культуры гепатоцитов, являясь элективным субстратом для размножения вирусов, вызывающих гепатиты, оказались чувствительными к другим вирусам. Так, в культуре клеток печени эмбриона кур хорошо размножались некоторые вирусы кур: инфекционного ларинготрахеита, бронхита, бурсита, EDS и CELO. Первичные культуры гепатоцитов лесного северо-американского сурка оказались чувствительными к инфицированию вирусами гепатита сурка и суслика, а культуры гепатоцитов пекинских уток — к вирусу утиного гепатита В.
Гепатоциты печени сурка, полученные перфузией раствором коллагеназы, формируют монослой, сохраняющийся в течение 3 мес.
Постоянные линии клеток, так же как первичные культуры, обладают различной чувствительностью к вирусам. Выбор наиболее чувствительного клеточного субстрата проводят на основе литературных данных или экспериментальным путем. Одни линии клеток являются хорошим субстратом для репродукции целого ряда вирусов. К ним прежде всего следует отнести постоянную линию клеток ВНК, высокочувствительную к таким возбудителям, как вирусы ящура, бешенства, катаральной лихорадки овец, болезни Ауески и др.
Широкое применение для производственного культивирования вирусов получили постоянные линии клеток обезьян (Vero), свиней (СПЭВ, ППС, IBRS-2), крупного рогатого скота (МДВК) и других видов животных. Вирус бешенства, адаптированный к размножению в культурах клеток ВНК-21 и Vero, через 24 ч инфицировал практически все клетки, однако в продуктивную инфекцию включалось лишь около 10 % клеток обеих линий. На пятые сутки концентрация вируса достигала 7,2 lg ТЦД50/мл или ЛД59/мл (для 3—5-недельных мышей). Линия клеток легких хомяка HmLu-1 оказалась чувствительной для репликации вирусов эфемерной лихорадки, Ибараки и Акабане. Указанные вирусы размножались в этой культуре с выраженным ЦПЭ через 48—72 ч.
Вирусы парагриппа человека типов 2 и 3 размножались с ЦПЭ в постоянной линии клеток почки африканской зеленой мартышки CV-1, достигая через 48—72 ч титра 7,0 lg БОЕ/мл.
Вирус гепатита В уток удалось размножить в линии клеток LMH гепатомы цыпленка. В этой линии клеток выход инфекционного вируса в 10—20 раз был выше, чем в линиях клеток гепатомы или гепатобластомы человека. Линия клеток рабдомиосаркомы человека (клон ВД-9Н8) эффективно поддерживала размножение респираторного коронавируса человека. Из-за строгого тропизма парвовируса В19 к эритроидным клеткам-предшественникам его размножали лишь в эксплантатах костного мозга и печени плода человека. Его удалось размножить в линии клеток ИТ-7, полученной от больного мегакариоцитобластоидной лейкемией. Высокое накопление вирулентного штамма вируса классической чумы свиней (8,0 lg ТЦД50/мл) наблюдали в статической культуре постоянной линии клеток почек свиньи (линия МРК). Вирус достигал высокого титра через 72 ч культивирования.
Полевой изолят вируса оспы овец адаптировали к постоянной линии клеток почек овцы. В первом пассаже вирус вызывал очаговый ЦГТЭ на 6-7-й день, а в четвертом пассаже - выраженный ЦГТЭ через 5-7 дней.
Постоянные линии клеток оказались эффективными культуральными системами для репродукции кишечных вирусов, клетками-мишенями для которых in vivo являются в основном эпителиальные клетки апикальной области ворсинок тонкого отдела кишечника. Сказанное прежде всего относится к рота-, корона-и астровирусам человека, а также животных.
Линия клеток карциномы прямой кишки человека (НТ-29) оказалась высокочувствительной системой для выращивания ротавирусов, особенно человека. К астровирусам человека оказалась чувствительной постоянная линия клеток СаС02, выведенная из карциномы толстого отдела кишечника человека.
Изучали чувствительность различных линий клеток свиного происхождения к вирусу трансмиссивного гастроэнтерита свиней (ТГС). Все девять изученных штаммов вируса ТГС хорошо размножались в линии клеток СРК и первичной культуре клеток почки поросят. Пять штаммов размножались с ЦПЭ в линии клеток IBRS-2. Ни один из штаммов не вызывал ЦПЭ в линиях клеток FSK и РК-15. Однако шесть штаммов приобрели способность размножаться и вызывать ЦПЭ после пассажа в клетках СРК. Трипсин оказывал стимулирующее действие на размножение вируса ТГС.
