MedUniver Микробиология
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Микробиология:
Общая микробиология
Общая бактериология
Экология микробов
Учение об инфекции
Лечение инфекций
Иммунология
Методы диагностики
Грам "+" бактерии
Грам "-" бактерии
Микобактерии
Хламидии. Риккетсии
Спирохеты. Трепонемы
Вирусы
Грибы
Простейшие
Гельминтозы
Санитарная микробиология
Книги по микробиологии
Рекомендуем:
Необходимое:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Факторы влияющие на размножение вирусов. Размножение вирусов в культуре.

Увеличение продукции вируса представляет собой большой практический интерес, особенно при массовом производстве вирусных препаратов. Изучению влияния различных факторов на репродукцию вирусов и накопление вирусных антигенов в культуре клеток посвящены многие исследования. Оказалось, что это зависит от ряда условий, оптимизация которых имеет важное технологическое значение.

Успех культивирования вирусов прежде всего зависит от удачного выбора клеточного субстрата. Основными критериями при этом являются высокий выход вируса и вирусного антигена, относительная неприхотливость к условиям культивирования и безопасность вакцины. Одни вирусы хорошо размножаются в культурах клеток различного происхождения, другие - предпочитают клетки естественного хозяина или дифференцированные, либо требуют специфических условий культивирования (пониженную температуру, обработку трипсином, высокую или низкую множественность заражения), третьи — вообще пока не удалось размножить вне организма.

При культивировании вирусов выявлен ряд особенностей, характерных для отдельных семейств и их представителей. Так, большинство пикорнавирусов, так же как и парвовирусов размножаются в культурах клеток естественного хозяина. Основная трудность в работе с ними — выбор чувствительной культуральной системы. Однако даже при оптимальном решении этой задачи, урожай различных представителей семейства пикорнавирусов различается очень сильно. Одни из них (полиовирус, вирус ящура) накапливаются в высоком титре (7,0—9,0 ТЦД50/мл), что соответствует выходу, примерно равному 10—1000 инфекционных единиц на одну клетку.

В то же время другие представители семейства (риновирусы, некоторые энтеровирусы, вирус гепатита А) накапливаются в более низком титре (4,0—6,0 lg Т1ДД50/мл).
Вирус гепатита А хорошо размножается в культуре клеток печени обезьяны, а вирус гепатита В впервые in vitro удалось размножить в культуре клеток гепатомы человека HepG = 2. В культуральную жидкость выделялись полные частицы вируса, содержащие три оболочечных белка. Рабдовирусы обладают широким хозяинным спектром in vitro. Вирус везикулярного стоматита, например, хорошо и быстро размножается практически во всех использованных для этой цели клеточных культурах, хотя некоторые представители этого семейства (вирус бешенства) размножаются медленно и накапливаются в меньшем титре.

размножение вируса диареи

Представители семейства парамиксовирусов значительно различаются между собой по широте хозяинного спектра клеточных культур. Одни из них (парамиксовирусы) обладают широким, другие (морбилливирусы) — узким хозяинным спектром. Респираторно-синцитиальный вирус (PC-вирус), как и другие представители семейства, размножается во многих клеточных культурах (но не в культуре куриного эмбриона), хотя накапливается в значительно более низких титрах. Например, разница в максимальном накоплении инфекционных частиц, если сравнить его с вирусом ньюкаслской болезни, достигает 5—6 lg. Вместе с тем следует отметить, что соотношение инфекционных и физических частиц у PC-вируса может достигать высоких значений (1:1000—1:10 000).

Вирус диареи крупного рогатого скота обладает узким клеточным тропизмом и, так же как PC-вирус, накапливается в чувствительных культурах в невысоком титре (4,0—6,0 lg ТЦД50/мл). Первичная культура клеток почки телят оказалась более чувствительной к полевым изолятам вируса диареи, чем постоянная линия этих клеток [977]. Реовирусы размножаются в культурах клеток различного происхождения, но лучше, когда выращивание проводят при пониженной температуре (34°С). Однако представители одного рода этого семейства (ротавирусы) проявляют исключительную щепетильность в отношении клеточного субстрата. Одна из лучших культур для выделения и размножения ротавирусов — постоянная линия клеток почки эмбриона макаки резус (линия МА 104). Для аденовирусов предпочтительным субстратом являются культуры эпителиальных клеток естественного хозяина.

В эпителиоподобных клетках постоянных линий HeLa и KB они накапливаются в более высоком титре, чем в диплоидных линиях фибробластоподобных клеток (WI-38 или MRC-5).
Культуры клеток беспозвоночных по сравнению с позвоночными во многих случаях оказались более продуктивными в отношении альфа- и флавивирусов.

Первичные культуры клеток, приготовленные из различных тканей одного вида животных или даже одного донора клеток, могут значительно различаться по чувствительности к данному вирусу. Большинство вирусов хорошо накапливаются в культуре клеток паренхиматозных органов, тогда как некоторые предпочитают клетки гемопоэтической системы (лимфопролиферативные вирусы, вирусы африканской чумы свиней, инфекционной анемии лошадей) или нервной ткани. Наиболее широким спектром чувствительности обладают первичные культуры, представленные преимущественно эпителиоподобными клетками. Такие культуры, как правило, получают из почечной ткани различных животных. Аденовирусы свиней серотипа 2 и 3 хорошо размножались в первичной культуре клеток почки (6,25—8,0 lg ТЦЦ50/МЛ), и значительно хуже в первичной культуре клеток тестикулярной ткани поросят. Для вируса контагиозной эктимы овец и коз более чувствительной оказалась культура тестикулярной ткани овец и коз.

Аналогичные результаты получены в опытах с вирусом висна-мэди. Вирус энцефаломиелита свиней размножается в культуре клеток почки свиньи с образованием синцития. В культурах клеток из других тканей свиньи вирус размножается без ЦПЭ.

Разработаны методы получения эпителиоподобных культур клеток из хориоаллантоисной оболочки куриных эмбрионов. Они оказались более чувствительными и продуктивными для ряда вирусов, чем культуры фибробласто-подобных клеток из тканей куриного эмбриона. Например, клетки хориоаллантоисной оболочки более репродуктивны для вируса ньюкаслской болезни, чем клетки тела куриного эмбриона. Кроме того, клетки одной и той же ткани могут сильно отличаться друг от друга по репродукции вируса. Исследование репродукции вируса ньюкаслской болезни единичными клетками куриного эмбриона показало, что из числа продуцирующих вирус клеток только 20% синтезируют инфекционный вирус в большом количестве. Указанное соотношение клеток сохранялось в культуре из различных тканей эмбриона в течение трех пересевов.

- Читать далее "Особенности культирования вирусов гепатита. Культивирование вируса гриппа."


Оглавление темы "Методология выращивания вирусов.":
1. Выращивание вирусов. Методика выращивания вирусов.
2. Факторы влияющие на размножение вирусов. Размножение вирусов в культуре.
3. Особенности культирования вирусов гепатита. Культивирование вируса гриппа.
4. Культуры диплоидных клеток. Адаптирование вирусов к культуральным средам.
5. Смена вирусной культуральной среды. Изменения вирусов при смене среды.
6. Температурный режим культивирования вирусов. Накопление вируса в среде.
7. Протеолитическая активация вирусов. Многофакторность размножения вирусов.
8. Однослойная культура клеток для вирусов. Размножение вирусов в однослойной культуре.
9. Применение однослойных клеточных культур. Выращивание вируса в однослойной культуре.
10. Выращивание вируса во вращающейся колонне. Культивирование вирусов для производства вакцин.
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта