Определение содержания аскорбиновой кислоты в моче
Основанием для использования метода определения содержания аскорбиновой кислоты в моче с целью диагностики функции яичников послужили наблюдения ряда авторов [Вихляева Е. М., Самборская Е. П., Фердман Т. Д., Pillay, Paeschke, Wagner и др.] о наличии тесной связи между обменом аскорбиновой кислоты, функцией яичников и стероидогенезом в яичниках и коре надпочечников. Так, установлено, что содержание аскорбиновой кислоты в яичниках зависит от возраста, физиологических особенностей женского организма и фаз менструального цикла.
По данным Wagner и соавт., у женщин детородного возраста содержание аскорбиновой кислоты составляет в среднем 443 мкг на 1 г ткани яичника. Экспериментальные ауторадиографические исследования с аскорбиновой кислотой, меченной 14С, показали, что накопление ее в ткани яичника происходит преимущественно в гранулезном эпителии зреющего фолликула. Аскорбиновая кислота участвует в стероидогенезе, преимущественно при реакции окисления.
При овуляции происходит ее выделение вместе с яйцеклеткой; установлено участие аскорбиновой кислоты в процессах оплодотворения и нидации плодного яйца (Paeschke).
Согласно наблюдениям Р. М. Лутошкиной, Nicora и Glarola, у здоровых женщин детородного возраста наибольшее количество аскорбиновой кислоты в плазме крови содержится в фазе роста и созревания фолликула. Так, в этой фазе содержание аскорбиновой кислоты в плазме крови составляет 0,019 ±0,0004 г/л, в фазе желтого тела —0,0092 ±0,0003 г/л, а уровень экскреции ее с мочой—0,99±0,03 и 0,77±0,11 мг/ч соответственно. Вместе с тем показатели клиренса аскорбиновой кислоты в этих фазах менструального цикла различаются не столь существенно: 1,44±0,06 в фазе роста и созревания фолликула и 1,2±О,05 в фазе желтого тела [Лутошкина Р. М.].
В середине менструального цикла уровень выделения аскорбиновой кислоты с мочой снижается, что связано с другими признаками овуляции. Однако падение уровня выделения аскорбиновой кислоты с мочой наблюдается за 2 дня до появления обычных признаков овуляции. По данным Р. М. Лутошкиной, в сроки, близкие к овуляции (±48 ч), содержание аскорбиновой кислоты в плазме крови составляет 0,0084 ±0,0002 г/л, уровень выделения ее с мочой — 0,52±0,02 мг/ч, а клиренс снижается почти в 2 раза по сравнению с первой фазой менструального цикла — до 0,76±0,04.
При ановуляторном цикле показатели экскреции аскорбиновой кислоты с мочой в различные сроки менструального цикла существенно не отличаются.
Тест для определения овуляции и функции желтого тела по уровню выделения аскорбиновой кислоты с мочой был впервые предложен в 1940 г. Pillay, который обнаружил, что в момент овуляции выделение кислоты заметно снижается и не зависит от пищевого рациона и различных внешних воздействий.
Другие авторы определяют уровень выделения аскорбиновой кислоты с мочой в условиях насыщения организма витамином С при одновременном контроле базальной температуры, циклических изменений в шейке матки и кольпоцитологических исследований. При ежедневной даче 0,5 г витамина С выделение его с мочой ко времени овуляции снижается, по данным Paeschke и Augustyn, на 50%.
Методика. Обследуемые получают внутрь один раз в день 0,5 г аскорбиновой кислоты. Уровень выделения ее с мочой определяют через 3—6 ч после приема. Определение аскорбиновой кислоты основано на исследовании порции мочи, выделенной за определенный промежуток времени, путем титрования ее 0,001 N раствором 2,6-дихлориндофенола. Устанавливают время сбора мочи, для чего утром отмечают время первого мочеиспускания. Затем берут исследуемую порцию мочи, учитывают ее объем.
В колбу наливают с помощью пипетки 0,5 мл ледяной уксусной кислоты, 40 мл мочи, 10,6 мл дистиллированной воды и титруют 0,001 ,N раствором. 2,6-дихлориидофенола до слабо-розового окрашивания, не исчезающего в течение 30 с. Проводят два параллельных исследования. Производят титрование в контрольной пробе (0,4 мл ледяной уксусной кислоты+14,5 мл воды).
Расчет: x=((а-б)xRx0,088xB/4г, где а — количество миллилитров краски, пошедшее на титрование исследуемой мочи (берут среднее из двух исследований); б — количество миллилитров краски, пошедшее на титрование контрольного раствора; К — поправка иа титр краски; В — объем собранной мочи в миллилитрах; г — время между двумя мочеиспусканиями в часах; 0,088 — количество аскорбиновой кислоты в миллилитрах, соответствующее 1 мл 0,001 N раствора краски.
При титровании этим реактивом удается определить только восстановленную или неокисленную аскорбиновую кислоту. Для одновременного определения аскорбиновой кислоты и ее метаболитов пользуются колориметрическим методом Роэ и Кютера.
Двухфазные колебания уровня выделения с мочой аскорбиновой кислоты со снижением во второй фазе нормального менструального цикла связывают с повышением уровня выделения ЛГ гипофизом.
