Цитология в ветеринарии. Цитологическое исследование мазков отпечатков
С целью определения эффективности выбранного способа лечения и суждения об иммунологических силах организма и регенеративных процессах в ране проводится цитологическое исследование мазков-отпечатков с раневой поверхности. Изготовление и анализ отпечатков раневой поверхности — технически простой выполнимый в любых условиях и достаточно объективный метод изучения раневого процесса. Систематическое исследование отпечатков раскрывает динамику морфологических изменений раневого экссудата и поверхностного слоя грануляционной ткани; они отражают реактивные, иммунобиологические силы организма и регенеративно-воспалительные процессы, протекающие в ране. Метод отпечатков позволяет судить о напряженности борьбы организма с инфекцией и о динамике очищения ран от микробов и некротических тканей.
Цитологический анализ отпечатков помогает установить фазу раневого процесса и может быть использован для оценки хирургического вмешательства, успешности медикаментозного лечения, а также уточнения показаний и противопоказаний к хирургическому вмешательству в дальнейшем. Однако цитологический анализ отпечатков — только дополнительный метод изучения раневого процесса и должен проводиться в комплексе с другими методами исследования пораженных животных.
Метод отпечатков с раневой поверхности, предложенный впервые Покровской и Макаровым и усовершенствованный в 1973 г. А. Н. Голиковым, заключается в том, что отпечатки изготовляются непосредственно с поверхности раны и наряду с клетками раневого экссудата в них находят клетки вновь образующейся грануляционной ткани.
Техника изготовления отпечатков. Отпечатки при помощи предметного стекла. Перед изготовлением отпечатка осторожно удаляют с поверхности раны стерильным марлевым тампоном, увлажненным изотоническим раствором натрия хлорида раневой экссудат (сухой тампон даже при легком прикосновении нередко травмирует грануляционную ткань, особенно в первые дни после ее образования). Затем перпендикулярным прикосновением к поверхности раны стерильным и обезжиренным в спирт-эфире стеклом получают на последнем отпечаток. При этом не допускается сильного надавливания стеклом на раневую поверхность и скользящих движений, так как в противном случае клетки деформируются.
С одного и того же участка раны последовательно берут 4—5 отпечатков. В первом участке преобладают клетки раневого экссудата и гнойный детрит. В последующие отпечатки, особенно в последние два, попадают клетки и микробы, находящиеся на раневой поверхности, в том числе клетки пролиферата (поверхностного слоя грануляционной ткани), имеющие наибольшее диагностическое значение.
Отпечатки следует брать с возможно большей поверхности или с нескольких участков раны, так как регенеративные процессы и распределение клеток по раневой поверхности неравномерны, а иногда противоположны.
Отпечатки при помощи ватного шарика. Перед взятием отпечатка удаляют с поверхности раневого канала кровь, гной, иной экссудат. Для получения раневого отпечатка пинцетом извлекают стерильный ватный шарик из пробирки с физиологическим раствором и вводят в раневой канал до соприкосновения с биологической тканью. Затем тампон одномоментно прикладывают к предметному стеклу.
Полученные отпечатки необходимо быстро подсушить на воздухе и зафиксировать в этиловом или метиловом алкоголе в течение 5 мин или спирт-эфире (в равных частях) 15 мин. Фиксированные отпечатки, пиофлорограммы, как и мазки крови, окрашивают по Романовскому—Гимзе (азур-эозин разбавляют дистиллированной водой 1 :10, мазок помещают в чашку Петри на стеклянные палочки отпечатком вниз и наливают краситель). Отпечатки с поверхности свежих ран следует красить 45—60 мин, а с поверхности гранулирующих ран 1—1,5 ч. После окраски мазок промывается дистиллированной водой.
После фиксации отпечатка на обратной стороне стекла отмечают восковым карандашом дату и номер истории болезни. Изготовленные таким образом отпечатки изучают под микроскопом.
